人羧肽酶A4(CPA4)重組蛋白適用于多肽 C 端精氨酸 / 賴氨酸剪切活性分析、腫瘤微環(huán)境重塑、細(xì)胞增殖侵襲體外酶學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。
型號(hào)：YS-DB793
產(chǎn)品名稱：人羧肽酶A4(CPA4)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Carboxypeptidase A4 (CPA4)
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來(lái)源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位：：分泌
預(yù)測(cè)分子量：44.9kDa
實(shí)際分子量：45kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))
片段與標(biāo)簽：Lys55~Tyr421 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 97%
等電點(diǎn)：6.0
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
檢測(cè)原理：
C 端芳香族氨基酸水解活性檢測(cè)：CPA 家族切除多肽 C 端疏水 / 芳香族氨基酸，熒光多肽底物水解產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)，定量羧肽酶活性。
特異性抗體免疫定量：抗 CPA4 特異性抗體避免 CPA1/2/3 亞型交叉反應(yīng)，ELISA 顯色定量重組蛋白總量。
免疫電泳純度鑒定：SDS-PAGE 分離蛋白，免疫印跡確認(rèn)目的條帶，評(píng)估純化純度與蛋白降解。
金屬離子依賴性驗(yàn)證：CPA4 活性依賴鋅離子，螯合劑去除鋅后酶活顯著下降，佐證酶源為目標(biāo)羧肽酶。
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常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景操作指南：
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
濃度優(yōu)化：先設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)梯度（如0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），檢測(cè)細(xì)胞增殖、分化或信號(hào)通路激活情況，確定最優(yōu)工作濃度。
添加時(shí)機(jī)：細(xì)胞接種后24-48小時(shí)，待細(xì)胞貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)添加重組蛋白。
更換培養(yǎng)基：若蛋白半衰期較短，需每隔24-48小時(shí)更換含新鮮蛋白的培養(yǎng)基。
免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置：在ELISA或WB實(shí)驗(yàn)中，用已知濃度的重組蛋白制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保定量準(zhǔn)確性。
封閉處理：若蛋白用于包被ELISA板，包被后需用5%脫脂牛奶或BSA封閉，降低非特異性結(jié)合。
抗體配對(duì)：選擇針對(duì)不同表位的捕獲抗體和檢測(cè)抗體，避免與重組蛋白的標(biāo)簽產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽選擇：若使用Pull-down實(shí)驗(yàn)，優(yōu)先選擇GST或His標(biāo)簽的重組蛋白，便于親和層析分離。
反應(yīng)條件：在生理緩沖液（如PBS）中進(jìn)行，溫度控制在4℃，避免蛋白變性。
陰性對(duì)照：設(shè)置不含目標(biāo)蛋白的對(duì)照組，排除標(biāo)簽非特異性結(jié)合的干擾。
關(guān)鍵字： 人羧肽酶A4;CPA4;重組蛋白;
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