黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選試劑盒(WST-8法)
分光法 50管
正式測定前取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
黃嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO or XOD)是體內(nèi)核酸代謝中的一種重要酶，可以催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤，并能進(jìn)一步催化黃嘌呤氧化為尿酸，同時(shí)產(chǎn)生過氧化氫以及超氧化物陰離子的一系列氧化反應(yīng)，在包括人類在內(nèi)的一些物種中的嘌呤分解代謝中起著重要作用。在人類及其它靈長類動(dòng)物中，XO通常存在于血清、肺、肝臟和腸黏膜中。在嚙齒類動(dòng)物中，XO在大部分組織中均有表達(dá)。血液中XO的活性通常都很低。當(dāng)感染甲型流感時(shí)，血清及肺部的XO活性會(huì)增加。當(dāng)肝功能受損時(shí)，XO會(huì)大量釋放到血液中，因此檢測血液中XO水平被作為一個(gè)評估嚴(yán)重肝損傷(例如黃疸)的靈敏指標(biāo)。XO也可能與痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)理相關(guān)，黃嘌呤氧化酶是尿酸形成的代謝途徑，因此使用黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌呤醇用于治療痛風(fēng)。此外，研究顯示抑制XO活性可緩解心血管疾病及慢性阻塞性肺疾病。
測定原理：
黃嘌呤在XO催化作用下產(chǎn)生的超氧化物陰離子(O2·–)，隨后與WST類指示劑(Indicator)反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲臜染料(Formazan dye)。甲臜染料在450nm左右有最大吸收峰，通過測定450nm處的吸光度就可以非常靈敏地檢測黃嘌呤氧化酶活性。如果在反應(yīng)中加入黃嘌呤氧化酶抑制劑(Inhibitor)，甲臜染料的生成就會(huì)被抑制，甲臜的生成量與抑制劑的抑制效果成反比，這樣就可以檢測出抑制劑的抑制效果。
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | OX031-50T | Storage |
試劑一：液體 | 100mL | 4℃ |
試劑二：液體 | 20μL | 4℃ |
試劑三：液體 | 300μL | -20℃避光 |
試劑四：液體 | 300μL | 4℃避光 |
試劑五：液體 | 500μL | -20℃避光 |
說明書 | 一份 |
試劑二工作液：試劑二為固液混懸液，于4℃保存；使用桌面離心機(jī)瞬離使內(nèi)容物沉底，并渦旋均勻，取用前需充分顛倒混勻，根據(jù)用量取0.5μL按照0.5μL：400μL的比例加入試劑一，現(xiàn)配現(xiàn)用，配制好后可在冰浴上暫時(shí)保存，1小時(shí)內(nèi)酶活性基本穩(wěn)定；
【強(qiáng)制校準(zhǔn)約定】以上為推薦稀釋比例。由于試劑二為混懸體系，批次間酶活存在差異，正式實(shí)驗(yàn)前必須通過預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ΔA陰性，以 0.5~1.2 為合格標(biāo)準(zhǔn)，按需微調(diào)稀釋比例；校準(zhǔn)完成后的工作液方可用于批量樣本檢測。
試劑三工作液：取適量的試劑三，按照1: 9的比例加入試劑一。配制好的試劑三工作液4℃或冰浴避光保存，當(dāng)天可使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用；
試劑四工作液：取適量的試劑四，按照1: 9的比例加入試劑一中。配制好的試劑四工作液4℃或冰浴避光保存，當(dāng)天可使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑五：10μM Febuxostat（非布司他）陽性對照，可以根據(jù)需要，使用與待測抑制劑一樣的溶劑稀釋至所需濃度或一系列濃度梯度。
需自備儀器和用品：
天平、可見分光光度計(jì)、1mL比色皿、恒溫水浴鍋、烘干機(jī)/凍干機(jī)、研缽/打粉機(jī)。
抑制劑準(zhǔn)備：
1、取適量待測定的抑制劑，用試劑一、超純水、DMSO等適當(dāng)?shù)娜軇┡渲瞥蛇m宜濃度的溶液，如果有必要可以配制成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻却?。（抑制劑的稀釋和配制建議使用同一種溶劑。）
2、若樣品為新鮮組織，則需對樣品進(jìn)行烘干，使用研缽或打粉機(jī)研磨成粉末后按上述步驟操作。
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關(guān)鍵字： WST-8法;黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選;試劑盒;
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我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
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