本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附原理，預(yù)先將大鼠LTB4抗原包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，實(shí)驗(yàn)時(shí)加入待測(cè)樣本與LTB4酶標(biāo)抗體，樣本中的游離LTB4抗原與微孔板上包被的固定抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的酶標(biāo)抗體，樣本中LTB4含量越高，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體就越少，洗滌去除未結(jié)合成分后加入底物顯色，顯色深淺與樣本中LTB4濃度呈負(fù)相關(guān)，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量檢測(cè)大鼠樣本中LTB4的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：LT-B4 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1431
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤1.5pg/mL
檢測(cè)范圍：5pg/mL - 1500pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng)4小時(shí)，抗原抗體充分結(jié)合
保存條件：2-8℃避光保存，標(biāo)準(zhǔn)品-20℃分裝保存
有效期：原裝6個(gè)月，分裝標(biāo)準(zhǔn)品1個(gè)月有效
顯色系統(tǒng)：適配脂質(zhì)因子檢測(cè)的專(zhuān)用TMB顯色體系
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm/620nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：8梯度濃度，四參數(shù)擬合，適配小分子檢測(cè)
特異性：特異性識(shí)別大鼠LTB4，與LTC4、LTE4無(wú)明顯交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%
注意事項(xiàng)：白三烯類(lèi)物質(zhì)易氧化，樣本需避光、低溫處理；實(shí)驗(yàn)全程避光操作
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
LTB4 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋?zhuān)噭┖惺覝仄胶?30min，排布酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白孔；
每孔加入 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品或大鼠肺泡灌洗液樣本，空白孔填充稀釋緩沖液；
加入 100μL 酶標(biāo)記抗 LTB4 抗體，封板膜密封板面；
37℃恒溫避光孵育 60min，一步共孵育抗原抗體結(jié)合；
洗板液浸泡微孔 40s，徹底拍干，循環(huán)洗滌 5 次；
避光添加顯色底物混合液 100μL，37℃避光顯色 15min；
終止液混勻微孔液體，450nm 測(cè)吸光度，計(jì)算 LTB4 含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠白三烯B4;LTB4;ELISA試劑盒;
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