本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板固定抗大鼠EGFR特異性捕獲抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和大鼠生物樣本后，樣本中的EGFR抗原被固相抗體特異性捕獲，洗滌干凈后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的EGFR檢測抗體，形成穩(wěn)定的夾心復(fù)合物，底物顯色后根據(jù)吸光度變化，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)測定樣本中EGFR的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒
英文名稱：EGFR ELISA Kit
貨號：Y-E1025
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤1.0pg/mL
檢測范圍：3pg/mL - 850pg/mL
反應(yīng)時間：全程3.7小時
保存條件：2-8℃密封保存，受體試劑避免凍融
有效期：未開封6個月，開封后2個月有效
顯色系統(tǒng)：受體蛋白專用TMB顯色系統(tǒng)
檢測波長：450nm主波長檢測
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7梯度標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù)擬合曲線
特異性：特異性結(jié)合大鼠EGFR，不識別其他生長因子受體
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7.5%，板間CV≤9.5%
注意事項：細(xì)胞組織樣本充分裂解；避免受體蛋白變性失活
通用注意事項：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：
EGFR 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶配制梯度，試劑盒室溫平衡 30min，標(biāo)記酶標(biāo)板孔類型；
標(biāo)準(zhǔn)孔加 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入大鼠細(xì)胞裂解液 50μL，空白孔補稀釋液；
全部微孔加入 100μL HRP 標(biāo)記抗 EGFR 特異性抗體，密封酶標(biāo)板；
37℃恒溫孵育 67min，一步形成抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物；
洗滌緩沖液浸泡 35s，吸干，循環(huán)洗板 5 次；
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光反應(yīng) 13min；
終止液終止反應(yīng)，450nm 檢測吸光度，換算 EGFR 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠表皮生長因子受體;EGFR;ELISA試劑盒;
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