本試劑盒運(yùn)用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA技術(shù),將大鼠OPG特異性單克隆抗體包被于酶標(biāo)板,待測大鼠樣本中的OPG抗原與包被抗體結(jié)合,再加入酶標(biāo)記多克隆抗體形成穩(wěn)定免疫夾心結(jié)構(gòu),底物顯色后測定吸光度,數(shù)值與樣本OPG含量成正比,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可完成樣本中骨保護(hù)素的定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 大鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1514 |
英文名稱 | OPG ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最低檢測濃度≤15pg/mL
檢測范圍:30pg/mL - 1200pg/mL
反應(yīng)時(shí)間:總反應(yīng)時(shí)長120分鐘(樣本溫育60分鐘、酶溫育30分鐘、顯色30分鐘)
保存條件:2-8℃避光冷藏,濃縮試劑使用前稀釋,剩余試劑密封保存
有效期:未開封有效期6個(gè)月,開封后2個(gè)月內(nèi)用完
顯色系統(tǒng):TMB底物顯色體系,顯色均勻、誤差小
檢測波長:450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,R2≥0.990
特異性:特異性識別大鼠OPG蛋白,無RANKL、骨鈣素交叉反應(yīng)
重復(fù)性:板內(nèi)CV≤8%,板間CV≤10%
注意事項(xiàng):骨組織、血清樣本均可檢測;樣本離心去除雜質(zhì),避免懸浮顆粒干擾讀數(shù)
關(guān)鍵注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對應(yīng)試劑盒的說明書,不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存,未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度(通常2-8℃或-20℃)
避免試劑污染,不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋,防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光,避免陽光直射影響結(jié)果
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實(shí)驗(yàn)操作流程:
試劑盒組分室溫平衡 33min,溶解 OPG 凍干標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋,劃分酶標(biāo)板孔型并編號。
一步直接加樣:標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 OPG 標(biāo)準(zhǔn)液 100μL,待測孔加大鼠骨組織上清樣本 100μL,空白孔加稀釋液。
封板膜封口,37℃恒溫孵育 68min,實(shí)現(xiàn) OPG 抗原與固相捕獲抗體結(jié)合。
倒掉孔內(nèi)液體,洗滌液浸泡每孔 36s 后棄除廢液,連續(xù)洗板 5 次,板底充分拍干。
所有檢測孔加入 HRP 標(biāo)記檢測抗體 100μL,避光封板,37℃孵育 33min。
依次添加顯色 A、B 液各 50μL,輕震混勻,避光 37℃顯色 19min。
加入終止液終止反應(yīng),450nm 酶標(biāo)儀讀數(shù),擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 OPG 濃度。
關(guān)鍵字: 大鼠骨保護(hù)素;OPG;ELISA試劑盒;
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