本試劑盒基于間接酶聯(lián)免疫吸附法原理，將大鼠單核細胞特異性抗原包被在酶標(biāo)板微孔中，封閉空白位點后加入待測樣本，樣本內(nèi)的抗單核細胞抗體可與固相抗原特異性結(jié)合，洗板除去游離雜質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記的抗大鼠免疫球蛋白二抗孵育結(jié)合，底物催化顯色后終止反應(yīng)，檢測吸光度值，其數(shù)值與樣本中AMA含量正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可實現(xiàn)樣本抗體的定量檢測。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒
英文名稱：AMA ELISA Kit
貨號：Y-E1206
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.12ng/mL
檢測范圍：0.25ng/mL - 15ng/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長130分鐘，樣本孵育70分鐘，二抗孵育40分鐘，顯色20分鐘
保存條件：試劑盒全部組分2-8℃避光冷藏，開封后密封防潮保存
有效期：未開封有效期8個月
顯色系統(tǒng)：單組分穩(wěn)定TMB顯色液，無需現(xiàn)配，硫酸終止液終止
檢測波長：450nm，參比波長600nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五梯度標(biāo)準(zhǔn)品濃度，四參數(shù)Logistic擬合，R2≥0.99
特異性：特異性結(jié)合大鼠單核細胞抗體，與淋巴細胞、粒細胞抗體無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤9%，板間CV≤10%
注意事項：避免樣本中存在細胞雜質(zhì)干擾結(jié)合反應(yīng)；洗滌充分去除未結(jié)合雜質(zhì)；顯色超時會導(dǎo)致本底偏高
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實驗步驟如下：
試劑盒室溫回溫 32min，稀釋濃縮洗滌緩沖液，配制酶標(biāo)工作液。
劃分酶標(biāo)板孔位，空白孔加入樣本稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)品、對照、待測樣本稀釋后加孔，同時加入酶試劑。
封板膜密封，37℃恒溫孵育 70min。
棄除孔內(nèi)廢液，洗板 5 次，每輪浸泡 35s，濾紙拍干板孔。
依次添加顯色液 A、B，避光室溫結(jié)合顯色 16min。
加入終止液終止反應(yīng)，混勻板內(nèi)液體。
酶標(biāo)儀 450nm 測吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣本 AMA 抗體水平。
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關(guān)鍵字： 大鼠抗單核細胞抗體;AMA;ELISA試劑盒;
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