本試劑盒采用高靈敏雙抗體夾心ELISA技術(shù)，酶標(biāo)板包被大鼠EPO特異性抗體，樣本中的紅細(xì)胞生成素抗原與包被抗體特異性結(jié)合，形成酶標(biāo)免疫復(fù)合物后催化底物顯色，吸光度與EPO濃度正相關(guān)，可精準(zhǔn)檢測(cè)大鼠樣本中EPO的分泌水平。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1563 |
英文名稱(chēng) | EPO ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤0.05mIU/mL
檢測(cè)范圍：0.1mIU/mL～20mIU/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng)105min，孵育75min，顯色20min，讀數(shù)5min
保存條件：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍，標(biāo)準(zhǔn)品需單獨(dú)密封保存
有效期：未開(kāi)封6個(gè)月，開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)有效
顯色系統(tǒng)：高靈敏TMB顯色系統(tǒng)，適配低濃度細(xì)胞因子檢測(cè)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，630nm參比校準(zhǔn)
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：多梯度標(biāo)準(zhǔn)品擬合，四參數(shù)曲線(xiàn)，R2≥0.993
特異性：特異性識(shí)別大鼠EPO，與促血小板生成素等造血因子無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%
注意事項(xiàng)：血液樣本采集后及時(shí)分離血清，避免溶血；標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)配現(xiàn)用，不可留存；顯色全程避光操作。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫回溫 28min，梯度稀釋 EPO 標(biāo)準(zhǔn)品，排布酶標(biāo)板空白對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)梯度、大鼠血漿樣本孔。
直接加樣 100μL 標(biāo)準(zhǔn)品與稀釋血漿樣本至對(duì)應(yīng)孔，空白孔加入等量稀釋緩沖液。
覆膜封口，37℃恒溫孵育 68min，固相捕獲 EPO 激素抗原。
倒掉孔內(nèi)廢液，洗滌液注滿(mǎn)每孔靜置 29s，洗板 4 次，倒扣拍干殘留洗液。
非空白孔加入酶聯(lián)二抗工作液 100μL，避光 37℃孵育 25min。
加入顯色底物液 100μL，避光輕微振蕩，顯色 13min。
終止液終止顯色，450nm 測(cè)定 OD 值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出 EPO 含量。
關(guān)鍵字： 大鼠紅細(xì)胞生成素;EPO;ELISA試劑盒;
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