雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，固相微孔板預(yù)包被抗大鼠 BTC 捕獲抗體，樣本分泌 BTC 結(jié)合固定抗體，洗滌后加入酶標記抗 BTC 檢測抗體構(gòu)建夾心免疫復(fù)合物，底物顯色讀取 OD 值，對照標準曲線定量 BTC 濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.1ng/mL

檢測范圍：0.2ng/mL - 8ng/mL

反應(yīng)時間：全程孵育反應(yīng)120分鐘

保存條件：試劑盒未開封2-8℃冷藏保存，嚴禁冷凍；開封后試劑密封2-8℃存放

有效期：未開封原裝試劑盒有效期6個月

顯色系統(tǒng)：TMB雙組分顯色系統(tǒng)，底物液A、B混合顯色

檢測波長：450nm主波長，630nm參比波長

標準曲線繪制：以標準品濃度為橫坐標，對應(yīng)OD值為縱坐標，繪制四參數(shù)擬合標準曲線，計算樣本濃度

特異性：僅特異性識別大鼠BTC，與大鼠其他同源細胞因子無交叉反應(yīng)，與小鼠、兔等異種物種BTC無明顯交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤8%，板間變異系數(shù)CV≤10%，重復(fù)性良好

注意事項：1. 試劑使用前需恢復(fù)室溫，充分混勻，避免氣泡產(chǎn)生；2. 洗板需徹底，避免殘留洗液影響顯色結(jié)果；3. 顯色反應(yīng)需避光進行，嚴格控制反應(yīng)時間；4. 樣本避免反復(fù)凍融，否則易導致蛋白降解影響檢測結(jié)果。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫復(fù)溫 25min，20× 洗滌液蒸餾水稀釋，底物避光存放。

標準品稀釋：BTC 凍干標準品溶解配置 6 個濃度梯度，雙復(fù)孔檢測。

樣本上樣：標準孔 50μL 梯度標準液，細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿 50μL 上樣。

酶結(jié)合物孵育：每孔 50μL HRP 標記 BTC 抗體，封膜 37℃避光孵育 63min。

洗板：洗滌液浸泡 33s，拍干，循環(huán)洗板 5 次。

顯色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃孵育 16min。

終止檢測：終止液混勻，7min 內(nèi) 450nm 讀數(shù)，換算 BTC 含量。