雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法，微孔板包被抗大鼠 β-DF 捕獲抗體，樣本分泌型 β 防御素結(jié)合固相抗體，洗板后加入 HRP 標(biāo)記抗 β-DF 檢測(cè)抗體形成夾心復(fù)合物，底物顯色讀取吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 β-DF 表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度≤1.2pg/mL

檢測(cè)范圍：3pg/mL - 900pg/mL

反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長150分鐘（60分鐘溫育+30分鐘二抗結(jié)合+30分鐘顯色）

保存條件：2-8℃避光冷藏，抗菌肽試劑低溫防潮保存

有效期：原裝未拆封12個(gè)月

顯色系統(tǒng)：HRP-TMB穩(wěn)定顯色體系

檢測(cè)波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：梯度標(biāo)準(zhǔn)品OD值擬合四參數(shù)曲線，計(jì)算β-DF濃度

特異性：特異性識(shí)別大鼠β-防御素，與α-防御素?zé)o交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%

注意事項(xiàng)：黏膜組織、血清樣本無菌采集，避免細(xì)菌污染；溫育條件恒定，保證抗原抗體結(jié)合穩(wěn)定。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫平衡 23min，20 倍洗滌液稀釋混勻，拆分酶標(biāo)板。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：β-DF 凍干標(biāo)準(zhǔn)品溶解配置 6 個(gè)梯度，設(shè)置空白零孔。

樣本上樣：標(biāo)準(zhǔn)孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)液，氣道黏膜勻漿、細(xì)胞上清 50μL 上樣。

孵育反應(yīng)：每孔 50μL HRP 標(biāo)記 β-DF 抗體，封膜 37℃避光孵育 62min。

洗板：洗滌液浸泡 32s，拍干，洗板 5 次。

顯色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃反應(yīng) 15min。

終止檢測(cè)：終止液混勻，7min 內(nèi) 450nm 讀數(shù)，計(jì)算 β 防御素濃度。