本試劑盒采用通用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被大鼠淋巴細(xì)胞因子特異性捕獲抗體，待測(cè)樣本中的各類(lèi)淋巴細(xì)胞因子可與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗去游離雜質(zhì)后，加入對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)記檢測(cè)抗體形成夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)底物催化顯色、終止反應(yīng)后測(cè)定吸光度，吸光度數(shù)值與樣本中淋巴細(xì)胞因子含量呈正相關(guān)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量樣本中目標(biāo)淋巴細(xì)胞因子的濃度水平。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：Rat lymphocyte factor ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1160
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于2.0 pg/mL
檢測(cè)范圍：10 pg/mL - 350 pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程120分鐘（樣本孵育60min、酶標(biāo)孵育30min、顯色30min）
保存條件：2-8℃避光密封保存，所有組分禁止冷凍
有效期：12個(gè)月
顯色系統(tǒng)：通用型HRP-TMB顯色系統(tǒng)，適配廣譜淋巴細(xì)胞因子檢測(cè)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，600nm校準(zhǔn)背景值
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2≥0.990
特異性：特異性識(shí)別大鼠各類(lèi)淋巴細(xì)胞活性因子，與非淋巴細(xì)胞因子交叉反應(yīng)率＜5%
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%
注意事項(xiàng)：樣本無(wú)溶血、無(wú)污染，保證因子活性；實(shí)驗(yàn)環(huán)境潔凈恒溫；試劑按需取用，避免反復(fù)開(kāi)封氧化失效。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫平衡 33min，稀釋濃縮洗滌緩沖液待用。
劃分酶標(biāo)板孔位，空白孔添加稀釋緩沖液，標(biāo)準(zhǔn)品、陰陽(yáng)性對(duì)照、待測(cè)稀釋淋巴細(xì)胞樣本搭配酶結(jié)合試劑加樣。
密封酶標(biāo)板，37℃孵育 67min。
洗板 5 次，浸泡 33s / 次，清除微孔內(nèi)全部廢液。
顯色液避光 37℃顯色 17min。
加入終止液終止反應(yīng)并水平搖勻酶標(biāo)板。
450nm 波長(zhǎng)檢測(cè) OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本淋巴細(xì)胞因子總含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠淋巴細(xì)胞因子;ELISA試劑盒;
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