本試劑盒運用雙抗體夾心酶免疫分析法核心原理，酶標(biāo)板微孔包被大鼠pERK特異性捕獲抗體，待測樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的pERK抗原可特異性吸附于固相抗體上，充分結(jié)合后洗除未結(jié)合物質(zhì)，加入對應(yīng)的酶標(biāo)檢測抗體形成免疫夾心復(fù)合物，利用酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顏色深淺與樣本中pERK含量成正比，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量測定大鼠樣本中pERK的濃度水平。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒
英文名稱：pERK ELISA Kit
貨號：Y-E1143
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤0.08ng/mL
檢測范圍：0.2ng/mL - 6ng/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長130min，37℃恒溫溫育
保存條件：2-8℃避光密封保存，底物液需單獨避光存放，禁止冷凍
有效期：未開封有效期6個月
顯色系統(tǒng)：高靈敏度TMB顯色體系，顯色均勻穩(wěn)定
檢測波長：450nm（檢測）、620nm（參比）
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：設(shè)置6個梯度標(biāo)準(zhǔn)濃度，測值后擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸系數(shù)R2≥0.995
特異性：特異性結(jié)合大鼠pERK1/2，與總ERK、其他磷酸化激酶無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV＜8%，板間CV＜10%
注意事項：樣本提取需加入磷酸酶抑制劑，防止蛋白去磷酸化；溫育過程避免孔板晃動，保證反應(yīng)均勻；終止后15min內(nèi)完成讀數(shù)
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實驗步驟如下：
微孔板分孔標(biāo)記，標(biāo)準(zhǔn)品做 6 倍梯度稀釋后每孔加 55μL，待測組織裂解液樣本每孔上樣 55μL。
無需洗板直接加入辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體工作液 95μL，封板后 37℃孵育 70min。
配置 1× 洗滌液，每孔加滿洗滌液浸泡 25s，棄液拍干，連續(xù)洗板 5 次。
避光環(huán)境下每孔先后加入顯色液 A、B 各 50μL，輕微震蕩，37℃避光顯色 15min。
每孔加入終止液 50μL，終止催化顯色反應(yīng)，充分混勻微孔板內(nèi)液體。
去除板底指紋與水漬，酶標(biāo)儀 450nm 測定 OD 值，空白孔數(shù)值用于基線扣減。
擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本 pERK 濃度，高濃度樣本用稀釋液稀釋后重新檢測校正結(jié)果。
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關(guān)鍵字： 大鼠磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶;pERK;ELISA試劑盒;
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