本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測原理，酶標(biāo)板微孔包被大鼠堿性磷酸酶（ALP）特異性抗體，可特異性捕獲樣本中的ALP蛋白抗原。加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本孵育結(jié)合，洗板去除游離物質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記的ALP檢測抗體，形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物。經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量大鼠樣本中堿性磷酸酶的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤0.1U/L

檢測范圍：0.2U/L - 30U/L

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長130min（酶孵育100min、顯色30min）

保存條件：2-8℃冷藏，酶試劑禁止震蕩、高溫，防止失活

有效期：原裝未開封12個月

顯色系統(tǒng)：堿性磷酸酶專用適配TMB顯色系統(tǒng)

檢測波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：梯度酶標(biāo)準(zhǔn)品檢測OD值，四參數(shù)擬合定量曲線

特異性：特異性識別大鼠ALP，與其他磷酸酶無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%

注意事項：樣本避免溶血，溶血會破壞堿性磷酸酶活性，影響結(jié)果
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫回溫 26min，稀釋洗滌濃縮液，梯度稀釋 ALP 標(biāo)準(zhǔn)品，裁剪酶標(biāo)板條。

標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度標(biāo)品 50μL，細(xì)胞 / 組織裂解樣本孔上樣 50μL 稀釋樣本，空白孔補稀釋液。

每孔加入酶偶聯(lián)工作液 100μL，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 54min。

洗板 4 次，洗液浸泡 25s 每次，棄液拍干微孔。

避光加入顯色 A、B 底物各 50μL，37℃避光顯色 11min。

終止液 50μL 加入各孔終止顯色。

450nm 讀 OD 值，標(biāo)準(zhǔn)曲線計算 ALP 含量。