本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，酶標(biāo)板微孔固定抗大鼠膠原酶II特異性捕獲抗體，用于捕獲樣本中的膠原酶II抗原。孵育結(jié)合后洗滌去除游離組分，加入酶標(biāo)檢測抗體形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，通過TMB底物顯色反應(yīng)呈現(xiàn)特異性顯色信號。顯色深淺對應(yīng)膠原酶II含量，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量檢測大鼠樣本中目標(biāo)蛋白濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度可達0.1ng/mL，可精準(zhǔn)檢測樣本中微量膠原酶II含量，無交叉干擾、檢測下限穩(wěn)定。

檢測范圍：0.2ng/mL - 8ng/mL，覆蓋大鼠血清、組織勻漿、細(xì)胞上清液中膠原酶II常規(guī)表達濃度區(qū)間。

反應(yīng)時間：整體實驗操作時長90分鐘，包含溫育、洗板、顯色、終止全流程，其中一抗溫育60分鐘，底物顯色15分鐘。

保存條件：試劑盒全套組分2-8℃避光冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；洗板液可室溫避光存放，避免高溫暴曬。

有效期：未開封原裝試劑盒有效期6個月，開封后組分密封避光保存，1個月內(nèi)使用完畢。

顯色系統(tǒng)：采用TMB底物顯色系統(tǒng)，辣根過氧化物酶（HRP）催化顯色反應(yīng)，顯色穩(wěn)定、梯度清晰。

檢測波長：酶標(biāo)儀標(biāo)準(zhǔn)檢測波長450nm，可兼容各類全自動、半自動酶標(biāo)儀。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)Logistic擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性擬合度R2≥0.990。

特異性：特異性識別大鼠膠原酶II，與大鼠膠原酶I、III及其他基質(zhì)金屬蛋白酶無明顯交叉反應(yīng)，特異性達標(biāo)率100%。

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤8%，板間變異系數(shù)CV≤10%，實驗重復(fù)性良好，數(shù)據(jù)誤差可控。

注意事項：實驗所有試劑需提前平衡至室溫使用；洗板需徹底，避免殘留液體影響顯色結(jié)果；樣本避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致蛋白降解，降低檢測準(zhǔn)確性。
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物

標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)

生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點

辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

所有試劑室溫平衡 30min，稀釋洗滌液，倍比稀釋 Collagenase II 標(biāo)準(zhǔn)品，拆分酶標(biāo)板條備用。

標(biāo)品孔加對應(yīng)梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔上樣待測裂解液 50μL，空白孔添加稀釋緩沖液。

全部孔位添加酶偶聯(lián)抗體 100μL，覆膜密封，37℃孵育 63min。

洗板 5 次，浸泡 30s 每次，甩干液體并倒扣拍干微孔。

避光添加顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 17min。

加入終止液 50μL 混勻終止顯色。

450nm 檢測吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線換算 Collagenase II 結(jié)果。