本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術原理，固相載體包被大鼠FⅩⅢ特異性抗體，樣本及標準品中的FⅩⅢ抗原與抗體特異性免疫結合，加入酶標記二抗后形成免疫復合物，催化底物顯色，顏色深淺對應FⅩⅢ含量，通過吸光度讀數(shù)及標準曲線換算實現(xiàn)定量檢測。
基本參數(shù)?：

產品名稱：大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)ELISA試劑盒

英文名稱：FⅩⅢ ELISA Kit
貨號：Y-E1105

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測下限≤0.07ng/mL，可精準檢出大鼠血漿中FⅩⅢ微量表達。

檢測范圍：0.1ng/mL - 19ng/mL，覆蓋大鼠凝血交聯(lián)、血栓形成相關樣本檢測區(qū)間。

反應時間：全程實驗95分鐘，樣本孵育30min、酶孵育30min、顯色20min、終止15min。

保存條件：2-8℃避光冷藏，微孔板開封后密封防潮，試劑嚴禁冷凍。

有效期：未開封試劑盒有效期6個月，規(guī)范存放性能穩(wěn)定。

顯色系統(tǒng)：高靈敏TMB顯色體系，顯色梯度清晰，適合微量凝血因子檢測。

檢測波長：450nm主波長，630nm參比波長，校正系統(tǒng)誤差。

標準曲線繪制：四參數(shù)Logistic擬合曲線，R2≥0.992，定量精度高。

特異性：專一識別大鼠凝血因子ⅩⅢ，無同源蛋白交叉反應。

重復性：板內CV≤7%，板間CV≤9%，重復性優(yōu)異。

注意事項：樣本采集后盡快檢測，避免FⅩⅢ活性衰減；實驗耗材無凝血污染。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

微孔板分孔上樣梯度標準品 50μL，抗凝血漿樣本 50μL，空白孔添加緩沖稀釋液。

酶結合檢測液 100μL 加入每孔，封板膜封閉，37℃孵育 61min。

洗板液加滿微孔靜置 32s，棄液拍干，重復洗滌 5 次。

避光依次加入顯色 A 液、B 液各 50μL，輕搖板體，避光顯色 19min。

每孔加入終止液 50μL 終止反應，混勻微孔板內體系。

酶標儀 450nm 讀取 OD 讀數(shù)，剔除異常復孔。

換算凝血因子 ⅩⅢ 濃度，檢測凝血交聯(lián)穩(wěn)定因子表達。
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