本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶免疫檢測(cè)原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被大鼠MIP-3α/CCL20特異性抗體，能夠特異性識(shí)別并結(jié)合樣本中的巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α抗原。孵育結(jié)合充分后洗滌去除游離雜質(zhì)，加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成免疫夾心復(fù)合物，底物顯色深淺對(duì)應(yīng)目標(biāo)蛋白含量。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可精準(zhǔn)定量大鼠樣本中MIP-3α/CCL20的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1647 |
英文名稱 | MIP-3偽 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度0.08pg/mL，可檢測(cè)微量炎性趨化因子。
檢測(cè)范圍：0.1pg/mL - 18pg/mL，適配大鼠皮膚、腸道炎癥組織及血清樣本。
反應(yīng)時(shí)間：全流程100分鐘，溫育70分鐘，顯色20分鐘。
保存條件：2-8℃避光冷藏保存，洗滌液室溫存放。
有效期：未開封有效期6個(gè)月，開封后30天內(nèi)使用。
顯色系統(tǒng)：TMB-HRP顯色體系，顯色均勻穩(wěn)定。
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm主波長(zhǎng)檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合，R2≥0.992。
特異性：特異性識(shí)別大鼠CCL20，與其他趨化因子無交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%。
注意事項(xiàng)：黏膜組織樣本需充分清洗勻漿；實(shí)驗(yàn)避光溫育，避免試劑失效。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑室溫靜置 35min，配制洗滌液，梯度稀釋 MIP-3α/CCL20 標(biāo)準(zhǔn)品，取出酶標(biāo)板條。
標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，待測(cè)樣本孔上樣 50μL 預(yù)處理上清，空白孔添加稀釋緩沖液。
全孔加入酶結(jié)合工作液 100μL，覆膜密封，37℃孵育 72min。
洗板 5 次，浸泡 35s 每輪，甩干液體拍干微孔殘留液體。
避光添加顯色 A、B 底物各 50μL，37℃避光顯色 20min。
加入終止液 50μL 混勻終止酶促反應(yīng)。
450nm 讀取吸光度，曲線定量 MIP-3α/CCL20 含量。
關(guān)鍵字： 大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α;MIP-3α/CCL20;ELISA試劑盒;
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