本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，固相酶標(biāo)板包被大鼠MIP-2特異性捕獲抗體，可特異性結(jié)合待測(cè)樣本中的巨噬細(xì)胞炎性蛋白2抗原。經(jīng)過(guò)孵育結(jié)合、洗板除雜、酶標(biāo)抗體結(jié)合、底物顯色反應(yīng)后，檢測(cè)所得吸光度值與樣本中MIP-2含量呈線性正相關(guān)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算，可精準(zhǔn)定量大鼠樣本中MIP-2的表達(dá)濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)下限0.1pg/mL，高靈敏度檢測(cè)炎癥相關(guān)炎性蛋白。

檢測(cè)范圍：0.2pg/mL - 22pg/mL，適配大鼠炎癥模型組織、血清、細(xì)胞上清。

反應(yīng)時(shí)間：全流程95分鐘，溫育65分鐘，顯色20分鐘。

保存條件：2-8℃避光保存，嚴(yán)禁冷凍試劑。

有效期：原裝有效期6個(gè)月，開(kāi)封后4周內(nèi)用完。

顯色系統(tǒng)：HRP催化TMB底物顯色，反應(yīng)穩(wěn)定靈敏。

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm檢測(cè)，630nm校正背景。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合曲線，R2≥0.991。

特異性：特異性結(jié)合大鼠MIP-2，與其他炎性蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%。

注意事項(xiàng)：炎癥樣本需低溫處理，防止因子降解；顯色時(shí)間嚴(yán)格把控，保證結(jié)果精準(zhǔn)。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒常溫放置 31min，配比濃縮洗滌液配制工作液，梯度稀釋 MIP-2 標(biāo)準(zhǔn)品，固定酶標(biāo)板條數(shù)。

標(biāo)品孔加梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，炎癥組織樣本孔加入稀釋后樣本 50μL，空白孔補(bǔ)樣本稀釋液。

每孔加入酶標(biāo)記抗體 100μL，封板 37℃孵育 65min。

洗板 5 次，浸泡 31s 每次，徹底棄凈液體后吸水紙拍干板孔。

避光加入顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 16min。

滴入終止液 50μL，輕微震蕩終止顯色。

酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)值，計(jì)算 MIP-2 樣本濃度。