本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，預(yù)先將純化的大鼠RANTES/CCL5特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔內(nèi)，形成固相抗體。檢測(cè)時(shí)，樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的大鼠RANTES/CCL5抗原會(huì)與固相抗體特異性結(jié)合，充分洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，形成“固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”的免疫復(fù)合物。再次洗滌洗除游離酶標(biāo)抗體后，加入底物TMB進(jìn)行顯色反應(yīng)，在HRP催化下TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，終止液作用后轉(zhuǎn)為黃色，最終通過酶標(biāo)儀測(cè)定450nm波長(zhǎng)處的吸光度值.
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤1.0pg/mL

檢測(cè)范圍：2.5pg/mL - 80pg/mL

反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)120分鐘（包被結(jié)合60min、酶促反應(yīng)30min、顯色反應(yīng)30min）

保存條件：試劑盒未開封2-8℃冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；開封后試劑密封2-8℃存放

有效期：未開封原裝試劑盒12個(gè)月

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm（主波長(zhǎng)），630nm（參比波長(zhǎng)）

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)Logistic擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合度R2≥0.990

注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)樣本需避免反復(fù)凍融，顯色過程避光操作，洗板需徹底，防止非特異性吸附影響檢測(cè)結(jié)果
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物

標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)

生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)

辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

1. 提前將試劑盒所有試劑、待測(cè)血清 / 組織上清樣本室溫平衡 30min，配制 1× 洗滌緩沖液，取出酶標(biāo)板預(yù)留所需孔位，剩余板條密封 4℃避光保存。

2. 設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔、待測(cè)樣本孔，每孔先加入 50μL 對(duì)應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本，空白孔加入等量樣本稀釋液。

3. 每孔立即加入 50μL 酶結(jié)合工作液，輕輕震蕩酶標(biāo)板 15s 混勻，封板膜密封板條，37℃恒溫孵育 60min。

4. 揭去封板膜，棄去孔內(nèi)全部液體，每孔加滿洗滌液靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，最后一次拍干孔內(nèi)殘留液體。

5. 每孔依次加入顯色底物 A 液、B 液各 50μL，避光輕柔震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。

6. 顯色完畢每孔快速加入 50μL 終止液終止反應(yīng)，輕晃酶標(biāo)板充分混勻。

7. 酶標(biāo)儀設(shè)定 450nm 波長(zhǎng)，15min 內(nèi)讀取各孔 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣本 RANTES/CCL5 實(shí)際濃度。