本試劑盒運(yùn)用經(jīng)典雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)原理，酶標(biāo)板微孔預(yù)先包被大鼠Lp-PL-A2特異性捕獲抗體。孵育過(guò)程中，樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的大鼠Lp-PL-A2抗原與固相捕獲抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合組分后，加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體與之結(jié)合，構(gòu)建固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的免疫復(fù)合物體系。隨后加入TMB底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，顯色強(qiáng)度與樣本中Lp-PL-A2濃度呈正向關(guān)聯(lián)，終止反應(yīng)后通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可準(zhǔn)確測(cè)定大鼠樣本中脂蛋白磷脂酶A2的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1343 |
英文名稱 | Lp-PL-A2 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤0.1ng/mL
檢測(cè)范圍：0.2ng/mL - 50ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)120分鐘（孵育60min、酶反應(yīng)30min、顯色30min）
保存條件：2-8℃冷藏，抗體、酶結(jié)合物組分需單獨(dú)密封避光保存
有效期：12個(gè)月
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm/630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，四參數(shù)Logistic回歸擬合，曲線相關(guān)系數(shù)R2≥0.990
注意事項(xiàng)：試劑使用前需平衡至室溫，孵育溫度嚴(yán)格控制在37℃，避免溫度偏差影響酶活性
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
1. 試劑室溫放置 30min 化開(kāi)結(jié)晶洗滌液，離心分裝待測(cè)樣本去除沉淀雜質(zhì)，裁剪對(duì)應(yīng)數(shù)量酶標(biāo)條，其余密封冷藏。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品孔梯度加樣 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)孔加入 50μL 處理后待測(cè)樣本，空白對(duì)照孔補(bǔ)加樣本稀釋液 50μL。
3. 每孔加入酶標(biāo)記物混合液 100μL，封板封口，水平晃動(dòng)酶標(biāo)板 10 秒，37℃水浴孵育 55min。
4. 棄液洗板，每孔灌滿洗滌液靜置 35s，甩干，連續(xù)洗板 6 次，吸水紙徹底拍干微孔。
5. 避光條件下每孔加入顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光孵育顯色 18min。
6. 精準(zhǔn)每孔滴加 50μL 終止液，充分震蕩混勻終止酶促顯色。
7. 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定 OD 值，依托標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 Lp-PL-A2 濃度。
關(guān)鍵字： 大鼠脂蛋白磷脂酶A2;Lp-PL-A2;ELISA試劑盒;
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