本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預(yù)先將純化的大鼠組織蛋白酶K（cath-K）特異性抗體包被于酶標板微孔內(nèi)，形成固相抗體；檢測時樣本、標準品中的cath-K抗原會與固相抗體特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標記的檢測抗體，形成固相抗體-抗原-酶標抗體的免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色液催化顯色，顯色深淺程度與樣本中cath-K含量呈正相關(guān)，最終通過酶標儀測定吸光度，結(jié)合標準曲線即可精準計算樣本中大鼠cath-K的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度可達0.1ng/mL，可精準識別樣本中微量cath-K蛋白，無基線干擾。

檢測范圍：0.2ng/mL - 80ng/mL，覆蓋大鼠組織、血清、細胞上清中cath-K常規(guī)表達濃度區(qū)間。

反應(yīng)時間：整體實驗操作時長90分鐘，其中溫育反應(yīng)分兩步，包被抗體結(jié)合30分鐘，底物顯色反應(yīng)15分鐘。

保存條件：試劑盒未開封組分2-8℃冷藏保存，嚴禁冷凍；開封后酶標板密封避光2-8℃存放。

有效期：未開封原裝試劑盒有效期12個月，嚴格按儲存條件保存可保證全程活性穩(wěn)定。

特異性：僅特異性結(jié)合大鼠組織蛋白酶K，與大鼠其他組織蛋白酶家族成員無交叉反應(yīng)，無種屬外源蛋白干擾。

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤6%，板間變異系數(shù)CV≤8%，實驗平行性與重復(fù)性良好。

注意事項：樣本需避免反復(fù)凍融，溶血、脂血嚴重樣本會干擾顯色結(jié)果；實驗全程避免強光直射，溫育溫度需嚴格控制在37℃。
試劑盒組成：

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標物

標準品 6支/套 制備標準曲線，定量檢測依據(jù)

生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標物，提供酶結(jié)合位點

辣根過氧化物酶（HRP）標記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫平衡 30min，配制洗滌液、樣本稀釋液、酶結(jié)合物工作液，取出所需板條，剩余板條密封冷藏保存。

設(shè)空白孔、標準品孔、待測樣本孔，每孔先加入 50μL 對應(yīng)稀釋后標準品 / 待測樣本，空白孔不加液體。

除空白孔外所有孔內(nèi)直接加入 100μL 酶標記抗原工作液，封板膜密封酶標板。

恒溫孵育箱 37℃避光孵育 60min，充分完成抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)。

撕去封板膜，棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，拍凈孔內(nèi)殘留液體。

每孔依次加入顯色劑 A 液 50μL、顯色劑 B 液 50μL，輕柔震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。

每孔加終止液 50μL 終止反應(yīng)，15min 內(nèi)使用酶標儀在 450nm 波長測定各孔 OD 值，根據(jù)標準曲線計算樣本 cath-K 濃度。