本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被純化的人DKK1特異性抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品、血清、細(xì)胞上清等待測(cè)樣本，樣本中的DKK1抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌后加入HRP標(biāo)記的DKK1抗體，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，測(cè)定各孔OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，精準(zhǔn)檢測(cè)樣本中人DKK1的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人Dickkopf 1(DKK1)ELISA試劑盒
英文名稱：DKK1 Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E231
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)值0.08ng/mL，適配腫瘤、發(fā)育相關(guān)微量DKK1蛋白檢測(cè)
檢測(cè)范圍：0.16ng/mL - 15ng/mL，覆蓋人體正常及腫瘤病變樣本表達(dá)范圍
反應(yīng)時(shí)間：全流程實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)95分鐘，反應(yīng)體系穩(wěn)定，顯色均勻快速
保存條件：2-8℃避光保存，終止液、顯色液分開存放，避免混色污染
有效期：未開封有效期12個(gè)月，試劑開封后密封保存可使用30天
特異性：特異性識(shí)別人類DKK1蛋白，與DKK2、DKK3、DKK4同源蛋白無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異＜7%，板間變異＜8%，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性優(yōu)異
注意事項(xiàng)：標(biāo)準(zhǔn)品需精準(zhǔn)稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用；溫育溫度嚴(yán)格控制在37℃，溫差過大會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏差
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
本試劑盒僅科研體外檢測(cè)，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強(qiáng)光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無(wú)酶、無(wú)熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會(huì)降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會(huì)造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會(huì)漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實(shí)驗(yàn)廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運(yùn)輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑室溫平衡 30min，配制洗滌工作液；DKK1 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后梯度稀釋，待測(cè)樣本離心分離上清備用。
預(yù)包被板設(shè)置空白、標(biāo)準(zhǔn)、待測(cè)孔，每孔加樣 100μL，空白孔加入空白稀釋液。
全部孔中直接加入酶偶聯(lián) DKK1 檢測(cè)抗體 100μL，混勻后封板膜封嚴(yán)微孔板。
37℃避光孵育 55min，不可中途掀開封板。
傾倒孔內(nèi)液體，加滿洗滌液浸泡 35s 后拍干，重復(fù)洗板 5 輪，去除非特異性結(jié)合物質(zhì)。
每孔加入 TMB 顯色底物 100μL，避光室溫顯色 16min。
加入終止液終止顯色，酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 DKK1 濃度。
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關(guān)鍵字： 人Dickkopf 1;DKK1;ELISA試劑盒;
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