本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，酶標(biāo)板微孔包被馬主要組織相容性復(fù)合體（MHC/ELA）特異性捕獲抗體，待測樣本中的MHC/ELA抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記檢測抗體構(gòu)建免疫夾心結(jié)構(gòu)，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，顯色深淺與抗原含量成正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量檢測馬MHC/ELA的表達(dá)含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出濃度0.09ng/mL，精準(zhǔn)檢測馬血清、淋巴細(xì)胞中MHC微量蛋白。

檢測范圍：0.18ng/mL - 95ng/mL，覆蓋馬免疫、遺傳育種實(shí)驗(yàn)檢測濃度區(qū)間。

反應(yīng)時間：總實(shí)驗(yàn)時長95分鐘，免疫蛋白孵育45分鐘，顯色20分鐘。

保存條件：2-8℃避光冷藏保存，免疫蛋白試劑穩(wěn)定性優(yōu)異。

有效期：嚴(yán)格儲存條件下有效期12個月。

特異性：專一識別馬MHC/ELA復(fù)合體，與其他哺乳動物MHC蛋白無交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7%，動物免疫實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá)標(biāo)。

注意事項(xiàng)：淋巴細(xì)胞樣本需無菌分離，雜菌污染會影響免疫蛋白檢測精度。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫回溫 30min，配比稀釋洗滌液，拆分微孔板條并編號標(biāo)記。

MHC 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，馬外周血淋巴細(xì)胞上清稀釋，每孔加 56μL 待測液或標(biāo)準(zhǔn)液。

直接加入酶標(biāo)檢測抗體 104μL，空白孔添加稀釋緩沖液，封板避光孵育。

37℃恒溫孵育 65min，完成一步夾心免疫結(jié)合。

自動洗板 5 輪，每輪浸泡 35s，去除未結(jié)合游離蛋白。

避光滴加顯色 A、B 液各 50μL，輕微震蕩后 37℃顯色 15min。

終止液終止反應(yīng)，12min 內(nèi) 450nm 檢測吸光度，計(jì)算馬 MHC 分子含量。