本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA原理,微孔板包被蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)特異性抗體,樣本中的BT蛋白與固相抗體特異性結(jié)合,結(jié)合酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成免疫復(fù)合物,經(jīng)顯色、終止步驟后,檢測(cè)吸光度,其數(shù)值與樣本中BT蛋白含量成正比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量樣本中BT蛋白濃度。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E3448 |
英文名稱 | BT ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最低檢測(cè)限0.02ng/mL,可精準(zhǔn)檢出樣本中微量BT殺蟲蛋白殘留
檢測(cè)范圍:0.04ng/mL - 30ng/mL,適配作物、土壤、植株組織樣本檢測(cè)
反應(yīng)時(shí)間:全流程100分鐘,適配微生物蛋白抗原抗體結(jié)合特性
保存條件:2-8℃冷藏保存,嚴(yán)禁冷凍,試劑開封后1個(gè)月內(nèi)用完
有效期:原裝未開封有效期12個(gè)月,儲(chǔ)存穩(wěn)定無活性衰減
特異性:專一識(shí)別蘇云金芽孢桿菌BT蛋白,與其他芽孢桿菌蛋白、植物內(nèi)源蛋白無交叉反應(yīng)
重復(fù)性:板內(nèi)CV≤5%,板間CV≤7%,批次檢測(cè)一致性良好
注意事項(xiàng):土壤、作物樣本需充分研磨、離心純化,去除雜質(zhì)干擾;實(shí)驗(yàn)耗材無蛋白污染,避免非特異性吸附;結(jié)果檢測(cè)需在顯色終止后15分鐘內(nèi)完成。
試劑盒組成:
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原,結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物,提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合,催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物,產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng),穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板,去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
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實(shí)驗(yàn)操作流程:
試劑盒組分室溫放置 25min,稀釋濃縮洗滌液,作物提取待測(cè)樣本經(jīng)離心過濾預(yù)處理,酶標(biāo)板劃分陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、標(biāo)準(zhǔn)品、樣品檢測(cè)孔。
陰性孔加陰性對(duì)照液,陽性孔加 BT 陽性對(duì)照,標(biāo)準(zhǔn)孔添加梯度 BT 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,樣品孔加入過濾稀釋后的待測(cè)提取液。
一步法直接加入酶標(biāo)記 BT 特異性抗體,封板包裹微孔板,輕微震蕩混勻孔內(nèi)反應(yīng)體系。
37℃避光孵育 50min,完成抗原 - 抗體夾心結(jié)合反應(yīng)。
揭膜棄液,每孔加滿洗滌液浸泡 28s,重復(fù)洗板 4 次,徹底清除未結(jié)合游離酶標(biāo)抗體。
加入顯色底物混合液,37℃避光顯色 14min,陽性孔顯深藍(lán)色,陰性孔無明顯顏色。
加入終止液終止顯色,混勻后酶標(biāo)儀讀數(shù),對(duì)照閾值判定樣本 BT 蛋白陽性 / 陰性及含量。
關(guān)鍵字: 蘇云金芽孢桿菌蛋白;BT;ELISA試劑盒;
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