本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附比色檢測原理，基于一氧化氮（NO）特異性生化反應與酶顯色體系結合，樣本中的一氧化氮可與試劑盒特異性試劑發(fā)生反應，結合酶催化底物顯色，通過檢測吸光度值，對照標準曲線定量測定大鼠樣本中一氧化氮的含量。
產品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測限0.1μmol/L，可精準檢測大鼠血清、組織上清微量NO含量

檢測范圍：0.2μmol/L - 100μmol/L，適配大鼠氧化應激、血管功能相關檢測

反應時間：全流程80分鐘，小分子物質反應快速穩(wěn)定

保存條件：2-8℃密封保存，試劑避免光照氧化，濃縮液防止結晶

有效期：未開封有效期6個月，短期儲存性能穩(wěn)定

特異性：特異性檢測大鼠NO代謝產物，與過氧化物、羥基自由基等氧化物質無交叉反應

重復性：板內CV≤5%，板間CV≤8%，符合實驗檢測標準

注意事項：樣本采集后立即檢測，NO易降解失效；避免樣本接觸空氣久置，減少氧化損耗；嚴格控制顯色時間，保證結果準確。
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑室溫放置 30min，稀釋濃縮洗滌液，大鼠體液樣本離心取上清稀釋備用，酶標板標記對照與樣品孔。

標準品孔添加 NO 系列梯度標準液，樣本孔加入大鼠待測稀釋樣本，空白孔添加稀釋緩沖液。

一步法加入酶標記反應結合液，封板覆膜包裹酶標板，輕柔搖勻孔內液體。

37℃避光孵育 55min，完成特異性結合反應。

傾倒孔內廢液，洗板 5 次，每孔浸泡 30s，徹底拍干微孔。

顯色混合液避光顯色 16min，統(tǒng)一環(huán)境條件顯色。

終止液終止反應，混勻后立即讀數(shù)，換算大鼠樣本一氧化氮檢測數(shù)值。