本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板預先固定人α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）特異性捕獲抗體，加入待測樣本與梯度標準品后，其中的α-SMA抗原與固相抗體特異性結合，洗滌去除游離雜質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體構建夾心免疫結構，經(jīng)洗滌純化、酶促顯色、終止反應后，檢測吸光度值即可精準定量樣本中α-SMA的濃度水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?1.靈敏度：檢出限≤2.2ng/mL

2.檢測范圍：4.4ng/mL - 140.8ng/mL

3.反應時間：抗原捕獲 86min，酶標二抗 51min，顯色 19min

4.顯色系統(tǒng)：預混型即用 TMB 顯色液

5.檢測波長：450nm+620nm

6.特異性：特異性結合平滑肌 α-SMA，橫紋肌、胞質(zhì)肌動蛋白無交叉識別

7.重復性：批內(nèi) CV≤6.5%，批間 CV≤9%

8.注意事項：固定組織提取液需徹底去除多聚甲醛殘留，甲醛會封閉抗原表位
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

1. 試劑盒組分室溫靜置 30min 平衡溫度，稀釋濃縮洗滌液，凍干標準品復溶后梯度稀釋，細胞上清樣本離心備用。

2. 排布空白孔、標準品梯度孔、樣本孔，標準孔加標準品 50μL，樣本孔加上清待測樣本 50μL，空白孔空置不加液。

3. 非空白孔每孔添加酶標記一抗工作液 100μL，封板膜封嚴板口，小幅晃動酶標板混勻體系。

4. 37℃恒溫孵育 60min，孵育過程酶標板不可挪動移位。

5. 揭膜倒出廢液，洗滌液浸泡 30s 甩干，洗板 5 次，濾紙徹底吸干孔內(nèi)殘留洗滌液。

6. 避光滴加顯色液 A、B 各 50μL，輕微震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。

7. 加入終止液終止顯色反應，酶標儀快速讀取 OD 值，繪制標準曲線計算 α-SMA 蛋白濃度。