本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，將人蛋白激酶C特異性捕獲抗體包被于微孔板固相載體，加入待測(cè)樣本后，樣本內(nèi)的PKC抗原與固相抗體特異性結(jié)合，經(jīng)洗板去除未結(jié)合物質(zhì)，加入對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成夾心免疫結(jié)構(gòu)，隨后啟動(dòng)底物顯色反應(yīng)，酶催化底物顯色的強(qiáng)度與樣本中PKC濃度成正比，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可完成樣本中目標(biāo)蛋白的定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒
英文名稱：PKC Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E3023
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：≤0.11ng/mL
檢測(cè)范圍：0.23ng/mL - 15ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng) 100min（樣本 50min，二抗 30min，顯色 20min）
顯色系統(tǒng)：雙組分 TMB A 液 + B 液混合顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)
特異性：廣譜識(shí)別人源 PKA 家族總蛋白，不結(jié)合絲氨酸其他激酶
重復(fù)性：板內(nèi) CV＜6.4%，板間 CV＜8.1%
注意事項(xiàng)：洗板步驟務(wù)必充分，殘留洗液會(huì)大幅降低檢測(cè)準(zhǔn)確度
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒常溫放置 28min，稀釋濃縮洗液，配制 PKC 梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)記酶標(biāo)板不同功能孔。
依次添加標(biāo)準(zhǔn)品、稀釋待測(cè)樣本、空白緩沖液，每孔加入酶標(biāo)記抗體工作液，密封酶標(biāo)板。
37℃避光孵育 58min，一步法完成抗原抗體結(jié)合。
棄除孔內(nèi)反應(yīng)液，洗滌液浸泡 30s，洗板 4 次，吸水紙拍干板條。
加入 TMB 顯色液，震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。
加入終止液終止酶促顯色，混勻體系。
450nm 波長(zhǎng)檢測(cè) OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 PKC 含量。
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關(guān)鍵字： 人蛋白激酶C;PKC;ELISA試劑盒;
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