本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，固相酶標(biāo)板包被有靶向人LCA/CD45的特異性捕獲抗體，實驗過程中，樣本及梯度標(biāo)準(zhǔn)品中的CD45抗原與固相抗體特異性結(jié)合，充分洗板去除游離雜蛋白后，加入HRP標(biāo)記的CD45檢測抗體，構(gòu)建完整的免疫夾心復(fù)合物；經(jīng)底物催化顯色、終止反應(yīng)后檢測吸光度，顏色深淺對應(yīng)樣本中LCA/CD45的含量高低，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸分析即可完成定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低可測 0.42 ng/mL

檢測范圍：0.85 ng/mL ~ 54 ng/mL

反應(yīng)時間：樣本上清孵育 115min，二抗 65min，顯色 17min

顯色系統(tǒng)：即用型穩(wěn)定 TMB 顯色液

檢測波長：450nm+620nm

特異性：廣譜識別人 CD45 所有亞型，與白細(xì)胞表面其他黏附分子無交叉

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7.9%，板間 CV＜10.5%

注意事項：組織勻漿樣本需充分離心去除殘渣；孔板密封孵育防止液體蒸發(fā)
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

酶標(biāo)板條室溫復(fù)溫 20min，標(biāo)準(zhǔn)品逐級稀釋，細(xì)胞裂解樣本按比例稀釋處理。

每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本 100μL，空白孔加稀釋液，同步加入酶標(biāo)記二抗 60μL 密封。

37℃濕盒孵育 90min。

洗板 6 次，每次浸泡 26s，充分去除游離蛋白雜質(zhì)。

加入顯色液 100μL，遮光 37℃顯色 11min。

終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 CD45 抗原表達(dá)量。