本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，微孔板固相包被人淀粉樣前體蛋白特異性捕獲抗體，待測樣本中的βAPP抗原與固相抗體特異性免疫結(jié)合，孵育洗滌后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體，形成完整的夾心免疫復(fù)合物，再次洗滌后加入顯色底物啟動(dòng)酶促反應(yīng)，顯色深淺與樣本中βAPP含量成正比，通過酶標(biāo)儀讀數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線換算實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量檢測。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人淀粉樣前體蛋白(βAPP)ELISA試劑盒

英文名稱：βAPP ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E3532

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：≤0.06ng/mL

檢測范圍：0.12ng/mL - 7.68ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長 165min（樣本 90min，二抗 55min，避光顯色 20min）

顯色系統(tǒng)：高靈敏捕獲法 TMB 顯色體系

檢測波長：450nm+620nm

特異性：識(shí)別全長 βAPP 前體蛋白，不單獨(dú)結(jié)合 Aβ 降解片段

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜4.9%，板間 CV＜6.2%

注意事項(xiàng)：腦脊液樣本低溫轉(zhuǎn)運(yùn)分裝，反復(fù)凍融會(huì)造成 APP 蛋白斷裂降解
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：

整套試劑室溫平衡 36min，稀釋洗滌工作液，逐級(jí)稀釋 βAPP 標(biāo)準(zhǔn)品，酶標(biāo)板劃分并編號(hào)各類反應(yīng)孔。

對(duì)應(yīng)孔位加入梯度標(biāo)準(zhǔn)液、稀釋待測樣本、空白稀釋液，加入一步法酶結(jié)合液，密封封板。

37℃避光孵育 76min，完成抗原與雙抗體一步結(jié)合。

去除封板傾倒廢液，洗滌液浸泡 35s，洗板 5 次，徹底拍干所有殘留液體。

加入顯色 A、B 液混勻，37℃避光顯色 24min。

加入終止液終止顯色，搖晃酶標(biāo)板混勻整體體系。

15min 以內(nèi) 450nm 波長檢測 OD 值，計(jì)算樣本 βAPP 濃度。
公司正在出售的產(chǎn)品：