本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測(cè)樣本中人表面活性蛋白D(SP-D)含量。試劑盒固相載體預(yù)固定SP-D特異性捕獲抗體，孵育后樣本中的SP-D與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)，加入生物素化檢測(cè)抗體與酶標(biāo)記鏈霉親和素，構(gòu)建穩(wěn)定免疫復(fù)合物，底物顯色強(qiáng)度隨SP-D濃度升高而增強(qiáng)，檢測(cè)吸光度并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確測(cè)定樣本中SP-D的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.095ng/mL

檢測(cè)范圍：0.19ng/mL～12.2ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：夾心法孵育 66min，酶結(jié)合二抗 34min，避光顯色 16min

顯色系統(tǒng)：雙組份 TMB 顯色液臨用配比

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm

特異性：?jiǎn)慰寺】贵w靶向 SP-D，不結(jié)合其余肺表面活性蛋白家族成員

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜6.3%，板間 CV＜9.3%

注意事項(xiàng)：微孔板開(kāi)封后防潮保存，洗滌液出現(xiàn)渾濁禁止繼續(xù)使用
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

設(shè)置對(duì)照孔與檢測(cè)孔，一次性加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本與生物素化抗體，封板 37℃孵育 68min，洗板 6 次。

洗滌工作液浸潤(rùn)微孔 20s 后棄液，多次洗滌后吸干板孔液體。

加入 HRP 親和素溶液避光孵育 28min，再次洗板 5 次。

添加 TMB 顯色液避光反應(yīng) 12min，加入終止液終止顯色。

酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)定各孔吸光度。

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)構(gòu)建定量曲線。

換算樣本 SP-D 蛋白含量，核對(duì)復(fù)孔誤差后確認(rèn)結(jié)果。