本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測(cè)樣本中人波形蛋白(VIM)含量。酶標(biāo)板預(yù)包被VIM特異性捕獲抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣本孵育，樣本中的VIM抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離雜質(zhì)后，加入生物素化檢測(cè)抗體與酶標(biāo)鏈霉親和素，形成穩(wěn)定夾心免疫復(fù)合物，底物顯色深淺與VIM濃度成正比，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)測(cè)定樣本中波形蛋白的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.06ng/mL

檢測(cè)范圍：0.12ng/mL～7.7ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：夾心法孵育 63min，二抗 36min，顯色 18min

顯色系統(tǒng)：?jiǎn)谓M份避光 TMB 顯色液

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm/630nm

特異性：抗波形蛋白特異性單抗，角蛋白、結(jié)蛋白等中間絲蛋白無交叉

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜5.6%，板間 CV＜8.6%

注意事項(xiàng)：組織樣本裂解避免高溫煮沸，防止波形蛋白降解斷裂
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

組織上清樣本、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記抗體同步加至板孔，密封 37℃孵育 60min，洗板 4 次。

洗滌液注滿微孔靜置 30s 棄液，重復(fù)洗滌后拍干孔內(nèi)液體。

加入顯色 A、B 混合液避光顯色 17min。

滴加終止液終止反應(yīng)，混勻酶標(biāo)板內(nèi)體系。

酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)定 OD 吸光值并記錄。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算濃度對(duì)應(yīng)關(guān)系。

換算樣本波形蛋白 VIM 表達(dá)濃度，完成數(shù)據(jù)歸檔。