本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理，預(yù)先將特異性人C4b抗體包被于微孔板固相載體上，加入待測(cè)樣本后，樣本中的人補(bǔ)體片斷4b可與固相抗體特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體夾心復(fù)合物，再次洗滌去除游離組分，加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，酶催化底物產(chǎn)生有色產(chǎn)物，顯色深淺與樣本中C4b含量呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)定量樣本中人補(bǔ)體片斷4b的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 人補(bǔ)體片斷4b(C4b)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E2816 |
英文名稱(chēng) | C4b ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低可檢測(cè)值 0.05ng/mL
檢測(cè)范圍：0.15ng/mL–9.6ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總時(shí)長(zhǎng) 110min（樣本孵育 60min，二抗孵育 30min，顯色 15min，終止 5min）
顯色系統(tǒng)：TMB 單組份顯色液，過(guò)氧化氫底物體系
檢測(cè)波長(zhǎng)：主波長(zhǎng) 450nm，參比波長(zhǎng) 630nm
特異性：僅與人 C4b 發(fā)生特異性結(jié)合，與 C4a、C3b、C5b 無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù) CV＜6.5%，板間變異系數(shù) CV＜8.0%
注意事項(xiàng)：試劑盒開(kāi)封后 1 個(gè)月內(nèi)用完；樣本避免反復(fù)凍融，離心去除溶血雜質(zhì)；終止液為稀硫酸，禁止接觸皮膚黏膜。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫平衡 30min，配置 C4b 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋液，取出包被酶標(biāo)板，標(biāo)記樣本孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔。
每孔依次加入對(duì)應(yīng)濃度 C4b 標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)人血清樣本、稀釋緩沖液（空白孔），每孔加樣量嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)定容。
一步法直接加入預(yù)先混合好的酶結(jié)合物工作液，封板膜密封酶標(biāo)板，37℃恒溫避光孵育 60min。
揭去封板膜，棄去孔內(nèi)全部液體，洗板液注滿每孔靜置 30s 后拍干，重復(fù)洗板 5 次，徹底去除未結(jié)合雜質(zhì)。
所有孔內(nèi)加入顯色底物 A、B 混合顯色液，室溫避光顯色 15min，觀察標(biāo)準(zhǔn)品孔梯度藍(lán)色顯色差異。
即刻向每孔加入終止液終止酶促顯色反應(yīng)，輕晃酶標(biāo)板混勻液體，溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)為黃色。
酶標(biāo)儀設(shè)置 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔 OD 吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣本中人 C4b 實(shí)際濃度，整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)歸檔。
關(guān)鍵字： 人補(bǔ)體片斷4b;C4b;ELISA試劑盒;
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