本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板預(yù)先固定抗大鼠C5a特異性捕獲抗體，加入待測樣本和梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的C5a抗原被固相抗體特異性捕獲，洗板凈化反應(yīng)體系，加入HRP標(biāo)記的C5a檢測抗體形成三元免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，檢測吸光度數(shù)值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)測定大鼠樣本中C5a的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒
英文名稱：C5a ELISA Kit
貨號：Y-E1284
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出限0.08ng/mL，能夠精準(zhǔn)捕捉大鼠低表達(dá)水平的C5a炎癥因子。
檢測范圍：0.2ng/mL - 10ng/mL，適配大鼠血清、腹水、組織裂解液中C5a含量檢測。
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長100分鐘，樣本孵育35min、酶結(jié)合物孵育30min、顯色20min、終止讀數(shù)5min。
保存條件：全套試劑2 - 8℃避光冷藏，濃縮洗滌液低溫易結(jié)晶，使用前可溫水輕微融化，禁止高溫加熱。
有效期：原裝未開封有效期6個月，反復(fù)凍融、室溫放置會大幅縮短試劑有效期。
顯色系統(tǒng)：高靈敏度TMB顯色體系，顯色梯度均勻，高濃度樣本無飽和顯色現(xiàn)象。
檢測波長：450nm單波長主檢測，可搭配600nm參比波長校正背景誤差。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，以濃度-OD值擬合四參數(shù)曲線，R2≥0.994，線性擬合度優(yōu)異。
特異性：僅特異性結(jié)合大鼠C5a抗原，與補(bǔ)體C3a、CFH及其他炎癥因子無交叉反應(yīng)，特異性純度高。
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤3.5%，板間CV≤5.5%，批次間檢測數(shù)據(jù)穩(wěn)定性強(qiáng)。
注意事項：洗滌過程需充分洗板，避免殘留洗液導(dǎo)致背景偏高；標(biāo)準(zhǔn)品需現(xiàn)配現(xiàn)用，稀釋后不可留存次日使用；孵育溫度嚴(yán)格控制在37℃，溫度偏差會影響抗原抗體結(jié)合效率。
通用注意事項：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：
C5a 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度配制，試劑盒室溫平衡 29min，劃分酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白孔；
標(biāo)準(zhǔn)孔加 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入大鼠血漿 50μL，空白孔補(bǔ)稀釋液；
全部微孔加入 100μL 酶標(biāo)記抗 C5a 特異性抗體，密封酶標(biāo)板；
37℃恒溫孵育 64min，一步同步共孵育抗原抗體結(jié)合；
洗滌液浸泡微孔 35s，吸干殘留液體，洗板 5 次；
避光加入顯色底物 A、B 各 50μL，37℃避光反應(yīng) 14min；
終止液終止顯色，450nm 讀數(shù)，計算 C5a 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠補(bǔ)體片斷5a;C5a;ELISA試劑盒;
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