本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，酶標(biāo)板微孔包被抗大鼠C3a特異性捕獲抗體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與大鼠待測樣本后，樣本中的C3a抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分，加入酶標(biāo)記C3a檢測抗體形成夾心復(fù)合物，底物顯色后吸光度值與C3a含量呈正相關(guān)，終止反應(yīng)后檢測讀數(shù)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量分析。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒
英文名稱：C3a ELISA Kit
貨號：Y-E1285
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度可達(dá)0.1ng/mL，可精準(zhǔn)檢測樣本中微量C3a含量，無假陰性、假陽性干擾。
檢測范圍：0.25ng/mL - 8ng/mL，覆蓋大鼠血清、組織勻漿、細(xì)胞上清液中C3a常規(guī)表達(dá)濃度區(qū)間。
反應(yīng)時間：整體實驗操作時長約90分鐘，包括樣本孵育30min、酶標(biāo)孵育30min、顯色反應(yīng)15min、終止靜置5min。
保存條件：試劑盒未開封組分2 - 8℃冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；開封后板條密封避光2 - 8℃保存，避免受潮污染。
有效期：未開封原裝試劑盒有效期6個月，開封后組分建議1個月內(nèi)使用完畢，確保檢測活性。
顯色系統(tǒng)：TMB雙組分顯色系統(tǒng)，底物液A、B等量混合使用，顯色穩(wěn)定、底色干凈。
檢測波長：主波長450nm，參比波長630nm，雙波長檢測降低孔底雜質(zhì)干擾。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù)Logistic擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)R2≥0.995。
特異性：特異性識別大鼠C3a蛋白，與大鼠C3、C5a、補(bǔ)體其他亞型無交叉反應(yīng)，與小鼠、兔等異種動物補(bǔ)體蛋白交叉反應(yīng)極低。
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤4%，板間變異系數(shù)CV≤6%，實驗重復(fù)性良好，數(shù)據(jù)偏差小。
注意事項：實驗所有試劑需提前平衡至室溫，孵育過程嚴(yán)格避光；樣本需避免溶血、脂血，溶血樣本會顯著干擾檢測結(jié)果；終止液為酸性腐蝕性液體，操作需佩戴手套，避免接觸皮膚；剩余試劑不可混用批次。
關(guān)鍵注意事項：
實驗前需仔細(xì)閱讀對應(yīng)試劑盒的說明書，不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光，避免陽光直射影響結(jié)果
實驗步驟如下：
室溫平衡試劑盒 31min，復(fù)溶 C3a 標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度梯度，排布酶標(biāo)板；
每微孔添加 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)品或大鼠體液上清，空白孔加稀釋緩沖液；
快速加入 100μL 辣根酶標(biāo)記抗 C3a 抗體，覆膜封閉；
37℃避光孵育 66min，一步孵育免疫結(jié)合；
洗板液浸泡微孔 30s，拍干，連續(xù)洗滌 6 次；
避光添加顯色底物混合液 100μL，37℃避光顯色 17min；
終止液混勻微孔液體，450nm 測吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計算 C3a 含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠補(bǔ)體片斷3a;C3a;ELISA試劑盒;
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