本試劑盒采用經典雙抗體夾心ELISA原理，固相微孔板包被人泛素分解酶(DUB)特異性抗體，孵育后樣本中的DUB抗原與固相抗體特異性結合，隨后結合酶標記檢測抗體形成完整免疫復合物，去除未結合物質后通過酶促底物顯色，吸光度與樣本DUB濃度呈正相關，可實現(xiàn)人DUB的精準定量檢測。
基本參數(shù)?：
產品名稱：人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒
英文名稱：DUB Elisa Kit
貨號：Y-E3062
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.11U/mg
檢測范圍：0.4U/mg - 36U/mg
反應時間：抗原孵育 70min，酶標記物 38min，顯色 17min
顯色系統(tǒng)：TMB 單液顯色體系
檢測波長：450nm
特異性：廣譜識別人源多數(shù) DUB 家族核心結構域，與 E1/E2/E3 無交叉
重復性：批內 CV≤7.3%，批間 CV≤9.2%
注意事項：裂解樣本全程添加蛋白酶抑制劑；顯色環(huán)境溫度控制在 22-25℃
試劑盒組成：
預包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結合目標物
標準品 6支/套 制備標準曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結合目標物，提供酶結合位點
辣根過氧化物酶（HRP）標記親和素 1瓶 與生物素結合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應底物，產生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應，穩(wěn)定顯色結果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結合物質
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實驗步驟如下：
所有試劑常溫靜置 30min，配比稀釋濃縮洗滌液，用稀釋液配制 DUB 梯度標準溶液，規(guī)劃 96 孔板排布。
各孔加入待測體系液體 50μL，隨即加入一步法酶聯(lián)反應液 100μL，封板膜嚴密封閉板口。
37℃隔水孵育避光 50min，孵育全程酶標板平放。
去除封板倒掉廢液，洗滌液灌滿孔位浸泡 40s，拍干，洗板 6 次。
每孔添加顯色 A、B 液各 50μL，輕微震蕩后 37℃避光顯色 11min。
加入終止液 50μL 終止反應，混勻孔內液體。
450nm 檢測 OD 值，擬合標準曲線定量 DUB 酶活性對應濃度。
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關鍵字： 人泛素分解酶;DUB;ELISA試劑盒;
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