人封閉抗體(BA)ELISA試劑盒：本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心原理，預(yù)先將純化的人封閉抗體特異性包被抗體固定于酶標(biāo)板孔內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本中的人封閉抗體可與包被抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)充分洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)后，加入底物顯色液發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，顯色深淺與樣本中人封閉抗體含量呈正相關(guān)，最后通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可精準(zhǔn)計(jì)算樣本中封閉抗體的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：人封閉抗體(BA)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：BA Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E403
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低可檢測(cè)濃度 0.5ng/mL
檢測(cè)范圍：1.5ng/mL～48ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 60min，二抗孵育 30min，底物顯色 15min，終止后立即讀數(shù)
顯色系統(tǒng)：TMB 單組分顯色液，酶促顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：主波長(zhǎng) 450nm，參比波長(zhǎng) 630nm
特異性：僅與人封閉抗體發(fā)生特異性結(jié)合，與人體其他同源抗體無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)＜8%，板間變異系數(shù)＜10%
注意事項(xiàng)：試劑盒需 2～8℃避光保存；顯色避光操作；標(biāo)本避免反復(fù)凍融，溶血樣本不可使用
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋?zhuān)ǔＲ?jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋?zhuān)?/span>
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋?zhuān)瑴啙針颖?12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
取出試劑盒室溫平衡 30min，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔，每孔加入對(duì)應(yīng)稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本各 50μL，空白孔不加液體。
所有孔內(nèi)立即加入一步法酶結(jié)合工作液 100μL，輕輕震蕩酶標(biāo)板混勻，封板膜密封板條。
將酶標(biāo)板置于 37℃恒溫孵育箱避光孵育 60min。
小心撕去封板膜，棄去孔內(nèi)全部液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，拍干板內(nèi)殘留液體。
每孔依次加入顯色底物 A 液、B 液各 50μL，輕柔混勻，37℃避光顯色 15min。
每孔快速加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng)，輕晃酶標(biāo)板混勻。
15min 內(nèi)使用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔 OD 值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本中封閉抗體含量。
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