本試劑盒基于間接ELISA檢測原理，將純化的人IgA抗原包被在酶標(biāo)板固相微孔內(nèi)，加入待測樣本，樣本中的抗IgA抗體可與固相IgA抗原特異性結(jié)合，洗板去除未結(jié)合成分后，加入酶標(biāo)記的抗人二抗與之結(jié)合，經(jīng)顯色、終止反應(yīng)后，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中人抗IgA抗體的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人抗IgA抗體(anti-IgA-Ab)ELISA試劑盒
英文名稱：anti-IgA antibody Elisa Kit
貨號：Y-E454
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：0.09μg/mL
檢測范圍：0.18–9μg/mL
反應(yīng)時間：包被板結(jié)合樣本 65min，二抗孵育 35min，顯色 13min，總 113min
保存條件：所有液體組分 2～8℃，凍干標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后分裝凍存
顯色系統(tǒng)：TMB 底物顯色
檢測波長：450/620nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：5 點(diǎn)濃度梯度，四參數(shù) Logistic 擬合曲線定量
注意事項：IgA 缺乏癥樣本易出現(xiàn)異常結(jié)果；復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品避免劇烈震蕩
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強(qiáng)光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運(yùn)輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
樣本前處理
靜脈血分離血清，渾濁樣本 12000rpm 離心 10min 取上清，分裝凍存樣本標(biāo)注日期，避免交叉污染。
試劑室溫適配
整套試劑室溫放置 28min，濃縮洗滌液用純水稀釋，攪拌均勻，當(dāng)日用完稀釋液。
標(biāo)準(zhǔn)品梯度加樣
抗 IgA 抗體標(biāo)準(zhǔn)品溶解稀釋成梯度濃度，每標(biāo)準(zhǔn)孔加入 50μL 稀釋液，空白孔僅加緩沖液。
一步法孵育加液
待測樣本 50μL，同步加入標(biāo)記 IgA 抗原工作液 50μL，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 58min。
洗板除雜操作
棄液后洗滌液加滿微孔浸泡 35s，拍干，循環(huán)洗板 5 次，防止殘留游離蛋白。
顯色避光培育
添加 TMB 顯色液 100μL，遮光 37℃反應(yīng) 16min，控制顯色時長一致。
終止檢測定量
終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本抗體濃度。
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關(guān)鍵字： 人抗IgA抗體;anti-IgA-Ab;ELISA試劑盒;
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