本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附檢測原理，微孔板預(yù)包被純化的人髓磷脂抗原，待測樣本中的抗髓磷脂IgA抗體可與固相髓磷脂抗原特異性結(jié)合，孵育后洗除非特異性結(jié)合物質(zhì)；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人IgA特異性二抗，與復(fù)合物中的AMA IgA抗體精準(zhǔn)結(jié)合，避免其他免疫球蛋白干擾；再次洗板后加入底物顯色，顯色強(qiáng)度與樣本中AMA IgA抗體含量成正比，終止反應(yīng)后檢測吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)特異性定量檢測。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人抗髓磷脂抗體IgA(AMA IgA)ELISA試劑盒

英文名稱：AMA IgA   Elisa Kit
貨號：Y-E419

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：0.52RU/mL

檢測范圍：1.04RU/mL - 33.28RU/mL

反應(yīng)時(shí)間：兩步孵育分別 66min、39min，顯色 14min

保存條件：試劑盒 2~8℃，終止液常溫密閉存放即可

顯色系統(tǒng)：單組分 TMB 顯色液

檢測波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合，空白孔扣除背景值后計(jì)算濃度

注意事項(xiàng)：多發(fā)性硬化癥輔助篩查，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥可造成一過性升高
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：

試劑盒室溫放置 32min，取出酶標(biāo)板，規(guī)劃孔位排布并標(biāo)記，剩余未用板條密封冷藏避光保存。

稀釋后待測樣本加入樣本孔 54μL，陰性、陽性對照孔加入對應(yīng)對照品 54μL，空白孔空置不加試劑。

一步法直接滴加酶結(jié)合標(biāo)記液 54μL 至所有檢測孔，封板嚴(yán)實(shí)封口，低速震蕩混勻孔內(nèi)液體。

37℃恒溫孵育 70min，酶標(biāo)板單層平放，不可疊加堆放。

去除封板膜，倒凈廢液，洗滌液灌滿每孔浸泡 39s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，充分去除未結(jié)合反應(yīng)物。

每孔依次加入顯色 A、B 液各 50μL，避光條件下 37℃顯色 9min。

加入終止液 50μL 終止反應(yīng)，混勻后酶標(biāo)儀 450nm 讀取 OD 值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 IgA 型髓磷脂抗體。
公司正在出售的產(chǎn)品：