本試劑盒基于間接酶聯(lián)免疫吸附原理,酶標板微孔包被Q熱特異性抗原,待測樣本中的抗Q熱抗體可與固相抗原特異性結(jié)合,洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)后,加入酶標記抗人二抗進行特異性結(jié)合反應,孵育完成后加入顯色底物產(chǎn)生有色反應產(chǎn)物,終止顯色后檢測吸光度,根據(jù)標準曲線計算樣本中抗Q熱抗體的濃度。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人抗Q熱抗體(anti-Q-Ab)ELISA試劑盒
英文名稱:anti-Q-Ab Elisa Kit
貨號:Y-E448
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低滴度 1:16
檢測范圍:定性陰陽性,定量 0.5–22AU/mL
反應時間:樣本孵育 100min,酶結(jié)合物 65min,顯色 19min,總 184min
保存條件:整套試劑 2~8℃避光,濃縮洗滌液室溫可存 6 個月
顯色系統(tǒng):單組份 TMB 顯色
檢測波長:450nm
標準曲線繪制:陽性血清梯度稀釋制作標準曲線,判讀抗體滴度
注意事項:野外接觸牲畜人群樣本易陽性;加樣防止氣泡產(chǎn)生影響讀數(shù)
實驗前準備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標簽標注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復溶 / 梯度稀釋:
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品,單獨標記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復凍融。
待測樣本預處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設備準備
設備:恒溫 37℃孵育箱、酶標儀(450nm 主波長,630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(或手動洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記:空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔(所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差)。
實驗步驟如下:

樣本采集處理
外周血分離血清,無微生物污染,樣本 4℃可保存 48h,長期低溫分裝凍存。
試劑盒試劑平衡
全套試劑室溫靜置 27min,稀釋濃縮洗滌液配制成 1× 工作液。
標準品梯度加孔
Q 熱抗體標準品溶解倍比稀釋 6 梯度,每孔添加 50μL 標準品稀釋液。
樣本共孵育步驟
待測樣本 50μL 入孔,加入酶標記 Q 熱抗原液 50μL,封板 37℃孵育 52min。
微孔洗滌操作
倒掉孔內(nèi)液體,洗滌液浸泡 35s 拍干,循環(huán)洗板 4 次,避免孔間液體飛濺。
避光顯色孵育
每孔加入顯色底物 100μL,遮光 37℃顯色 13min。
終止結(jié)果判讀
終止液終止顯色,450nm 讀取 OD 值,對照臨界值判定抗體陰陽性。
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關鍵字: 人抗Q熱抗體;anti-Q-Ab;ELISA試劑盒;
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