本試劑盒基于間接酶聯(lián)免疫吸附原理，酶標板微孔固定包被人白蛋白抗原，待測樣本中的抗白蛋白抗體可與固相白蛋白抗原特異性結合，洗滌清除游離雜質后，加入酶標記抗人二抗孵育反應，后續(xù)經顯色、終止步驟，通過酶標儀檢測吸光度，結合標準曲線定量檢測樣本中人抗白蛋白抗體的含量。
基本參數(shù)?：

產品名稱：人抗白蛋白抗體(AAA)ELISA試劑盒

英文名稱：AAA Elisa Kit
貨號：Y-E442

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：0.1μg/mL

檢測范圍：0.2–12μg/mL

反應時間：樣本結合 70min，酶標二抗 45min，顯色 15min，總 130min

保存條件：試劑盒 2～8℃，洗滌濃縮液常溫放置

顯色系統(tǒng)：雙液混合 TMB 顯色

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：梯度標準品構建線性標準曲線定量

注意事項：輸注異體蛋白樣本易產生該抗體；加樣槍頭一次性更換杜絕交叉污染
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

樣本制備

采集血清樣本自然凝固離心取上清，樣本若濃度過高可預先用樣本稀釋液 1:5 稀釋后檢測。

試劑回溫配制

所有試劑室溫平衡 35min，稀釋濃縮洗滌液配制成工作洗滌液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品梯度稀釋

AAA 標準品溶解后梯度稀釋 7 組濃度，每標準孔添加 50μL 標準品稀釋液。

樣本標記物同步加樣

待測樣本 50μL 入孔，加入 HRP 標記人白蛋白抗原 50μL，封板 37℃孵育 63min。

洗板除雜操作

倒掉孔內反應液，洗滌液浸泡 40s 拍干，連續(xù)洗板 4 次，吸干微孔殘留液體。

顯色避光培育

加入 TMB 顯色液 100μL，37℃避光顯色 15min。

終止讀數(shù)判量

終止液終止顯色，酶標儀 450nm 測 OD 值，計算樣本抗白蛋白抗體含量。
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