本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理測(cè)定人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)含量,將人CAD特異性單克隆抗體包被于微孔板作為固相載體,加入待測(cè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)品后,樣本中的CAD抗原與固相抗體特異性結(jié)合,經(jīng)洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì),加入酶標(biāo)記二抗形成夾心免疫復(fù)合物,底物作用下產(chǎn)生顯色反應(yīng),終止反應(yīng)后通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度,吸光度值與樣本中CAD濃度成正比,借助標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量檢測(cè)樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶(CAD)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E3069 |
英文名稱 | CAD Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:檢測(cè)極限 0.1ng/mL
檢測(cè)范圍:0.2ng/mL~75ng/mL
反應(yīng)時(shí)間:封閉后樣本孵育 55min,二抗 30min,整體 125min
顯色系統(tǒng):OPD 底物顯色體系
檢測(cè)波長(zhǎng):492nm 主波長(zhǎng)
特異性:專一結(jié)合 CAD 蛋白,與 ICAD 抑制蛋白無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性:板內(nèi) CV<7.2%,板間 CV<10.2%
注意事項(xiàng):OPD 底物避光配制,現(xiàn)配現(xiàn)用不可隔夜存放
關(guān)鍵注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū),不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲(chǔ)存,未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度(通常2-8℃或-20℃)
避免試劑污染,不同組分的移液器槍頭需分開(kāi)使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋,防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果
顯色過(guò)程需避光,避免陽(yáng)光直射影響結(jié)果
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實(shí)驗(yàn)操作流程:
試劑盒室溫放置 35min,稀釋濃縮洗滌液,取出實(shí)驗(yàn)所需微孔板條,其余板條密封 2~8℃存放。
梯度稀釋 CAD 標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度液,待測(cè)細(xì)胞裂解液 / 血清樣本離心取上清并稀釋。
微孔內(nèi)分別添加標(biāo)準(zhǔn)品溶液、待測(cè)稀釋樣本、空白稀釋液,隨即加入酶標(biāo)工作液,封板密封。
37℃恒溫避光孵育 65min,讓一抗、樣本抗原、酶標(biāo)二抗完成一步夾心結(jié)合。
棄液洗板:每孔加滿洗滌液浸泡 45s,倒扣拍干,重復(fù)洗滌 5 次,徹底洗去非特異性結(jié)合雜質(zhì)。
加入 TMB 顯色液,避光條件下 37℃顯色 14min。
加入終止液終止反應(yīng),酶標(biāo)儀 450nm 檢測(cè)吸光度,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 CAD 含量。
關(guān)鍵字: 人胱天蛋白酶激活的脫氧核糖核酸酶;CAD;ELISA試劑盒;
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