本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)人核基質(zhì)蛋白22（NMP-22）濃度，微孔板預(yù)先包被人NMP-22特異性捕獲抗體，加入待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本中的NMP-22抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合成分，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體構(gòu)建免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，吸光度數(shù)值與樣本中NMP-22含量成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的定量檢測(cè)。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出 1.0U/mL

檢測(cè)范圍：1.2U/mL～120U/mL

反應(yīng)時(shí)間：室溫孵育 80min，酶結(jié)合物 45min，總時(shí)長(zhǎng) 170min

顯色系統(tǒng)：?jiǎn)谓M份長(zhǎng)效 TMB 顯色液

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，校正 580nm

特異性：特異性結(jié)合尿液中人 NMP22，無(wú)尿蛋白非特異結(jié)合

重復(fù)性：批內(nèi) CV≤7.0%，批間 CV≤10.0%

注意事項(xiàng)：晨尿樣本最佳，放置超過(guò) 4h 需棄用重新取樣
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫回溫 30min，配比稀釋洗滌液，拆分微孔板條，未用板條密封避光冷藏。

倍比稀釋 NMP-22 標(biāo)準(zhǔn)品，尿液、體液待測(cè)樣本離心過(guò)濾后稀釋處理。

各微孔添加標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本、空白液，隨即加入酶結(jié)合物工作液，封板膜封口。

37℃避光孵育 58min。

傾倒孔內(nèi)液體，洗滌液浸泡 30s，拍干洗板，連續(xù)洗滌 6 次。

加入顯色液 37℃避光顯色 12min。

滴加終止液混勻，酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，計(jì)算樣本 NMP-22 含量。