本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，微孔板固相包被KLK11特異性捕獲抗體，加入待測樣本后，樣本內(nèi)激肽釋放酶11抗原與固相抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)記KLK11檢測抗體形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，洗滌去除游離組分后，底物催化顯色，顯色強度與樣本中KLK11濃度正相關(guān)，通過酶標(biāo)儀讀數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線計算可定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.12ng/mL

檢測范圍：0.28ng/mL~8.96ng/mL

反應(yīng)時間：37℃溫浴 86min；酶標(biāo)抗體 43min；避光顯色 18min

保存條件：2~8℃儲存，板條剩余部分必須密封防潮

顯色系統(tǒng)：HRP 介導(dǎo)單組份 TMB 顯色

檢測波長：450nm+650nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為 X，校正 OD 值為 Y 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：孵育環(huán)境溫度穩(wěn)定在 25~37℃，溫度波動過大影響結(jié)合效率
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

樣本制備：血清樣本融化稀釋，剔除嚴(yán)重黃疸樣本，混勻后冰浴保存。

酶標(biāo)板加液：KLK11 包被 96 孔板，標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本、空白對照每孔加樣 100μL。

一步添加酶標(biāo)抗體：全部孔位加入 HRP 標(biāo)記二抗 55μL，輕晃密封。

恒溫孵育：37℃避光孵育 65min。

洗滌步驟：洗滌緩沖液洗板 5 次，浸泡 30s 后拍干殘留洗液。

顯色反應(yīng)：等量添加顯色 A、B 液，避光顯色 14min。

終止讀數(shù)：終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀檢測 OD 值計算 KLK11 濃度。