本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，固相載體包被KLK6特異性捕獲抗體，待測(cè)樣本中的激肽釋放酶6與固相抗體特異性免疫結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)記KLK6檢測(cè)抗體形成夾心復(fù)合物，經(jīng)洗滌純化后加入底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，產(chǎn)物吸光度值與樣本中KLK6含量成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量樣本中KLK6的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人激肽釋放酶6(KLK6)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E3038 |
英文名稱 | KLK6 Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：≤0.09ng/mL
檢測(cè)范圍：0.22ng/mL~7.04ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 70min；二抗 34min；顯色 14min
保存條件：試劑盒 2~8℃，濃縮稀釋液不可冷凍結(jié)冰
顯色系統(tǒng)：雙組分 TMB 顯色體系
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：設(shè)置空白孔歸零后線性繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，稀釋樣本換算原始濃度
注意事項(xiàng)：所有試劑回溫至室溫后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，防止溫差導(dǎo)致孔間差異
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
樣本預(yù)處理：腦脊液、血清樣本稀釋處理，過(guò)濾去除絮狀雜質(zhì)備用。
微孔板上樣：KLK6 預(yù)包被板設(shè)置復(fù)孔對(duì)照，每孔加入對(duì)應(yīng)液體 100μL。
共加酶標(biāo)記工作液：無(wú)需預(yù)洗板，加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體 60μL，封板混勻。
避光孵育結(jié)合：37℃恒溫孵育 61min。
洗板除雜：洗板 4 次，每次浸泡 32s，徹底吸干廢液。
底物顯色：加入 TMB 顯色液避光顯色 13min。
終止上機(jī)檢測(cè)：終止液終止酶促反應(yīng)，450nm 讀取吸光度定量 KLK6。
關(guān)鍵字： 人激肽釋放酶6;KLK6;ELISA試劑盒;
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