本試劑盒運(yùn)用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理,將純化的天然脫氧核糖核酸(n-DNA)抗原包被于微孔板固相載體,待測樣本中的抗天然DNA抗體可與固相n-DNA抗原特異性結(jié)合;孵育反應(yīng)后洗板清除未結(jié)合雜質(zhì),加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人二抗與固相上的n-DNA-Ab結(jié)合,形成免疫復(fù)合物;底物顯色后,顯色強(qiáng)度與樣本中n-DNA-Ab含量正相關(guān),終止反應(yīng)后檢測吸光度,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒
英文名稱:n-DNA-Ab Elisa Kit
貨號(hào):Y-E479
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:0.45IU/mL
檢測范圍:0.9IU/mL - 28.8IU/mL
反應(yīng)時(shí)間:37℃溫育 78min,二抗 43min,顯色 17min
保存條件:2~8℃避光,DNA 包被板避免反復(fù)溫差環(huán)境,防止抗原脫落
顯色系統(tǒng):TMB 單液顯色
檢測波長:450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:7 點(diǎn)標(biāo)品線性擬合,結(jié)果用于紅斑狼瘡活動(dòng)性評估
注意事項(xiàng):狼瘡活動(dòng)期數(shù)值顯著升高,藥物緩解后抗體滴度下降,適合動(dòng)態(tài)復(fù)查
試劑盒組成:

預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原,結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物,提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合,催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物,產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng),穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板,去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下:

試劑盒室溫靜置 35min,取出預(yù)裝包被微孔板,標(biāo)記各組實(shí)驗(yàn)孔位,拆分多余板條密封低溫保存。
稀釋待測樣本加入樣本孔 66μL,陰陽性對照孔添加對應(yīng)對照液 66μL,空白孔不加液。
直接向所有加樣孔加入酶標(biāo)記抗原工作液 66μL,覆膜封口,輕微搖晃酶標(biāo)板使體系混勻。
37℃恒溫避光孵育 63min,防止光照導(dǎo)致酶活性下降。
揭去封板膜,傾倒孔內(nèi)廢液,洗滌液注滿每孔浸泡 34s 棄去,循環(huán)洗板 6 次,徹底拍干微孔殘留洗液。
每孔加入顯色混合液 100μL,37℃避光顯色 12min。
加入終止液 50μL 終止酶促反應(yīng),混勻后 15min 內(nèi) 450nm 讀取 OD 值,對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算抗體含量。
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關(guān)鍵字: 人抗天然脫氧核糖核酸抗體;n-DNA-Ab;ELISA試劑盒;
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