本試劑盒以雙抗體夾心ELISA法為檢測核心原理，酶標板微孔固定CD32特異性捕獲抗體，待測樣本中的FcγRⅡ抗原與固相抗體特異性結(jié)合，加入酶標記檢測抗體形成夾心免疫結(jié)構(gòu)，經(jīng)洗滌去除非特異性結(jié)合物質(zhì)后，啟動酶促顯色反應，終止后測定吸光度值，依據(jù)標準曲線即可精準定量樣本中FcγRⅡ的表達水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.76 ng/L

檢測范圍：6ng/L～380ng/L

反應時間：室溫樣本結(jié)合 65min，二抗 55min，顯色 19min，總 139min

保存條件：試劑盒主組分 2-8℃，洗滌濃縮液室溫儲存

顯色系統(tǒng)：A、B 液等體積混勻后顯色，鹽酸終止

檢測波長：450nm 單波長

標準曲線繪制：5 點梯度，最小二乘法繪制標準曲線

注意事項：禁止使用含抗凝劑肝素過量的血漿樣本，會抑制抗原結(jié)合
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

樣本前處理：體液樣本 3500r/min 離心 8min 取上清，按比例稀釋；梯度配制 CD32 標準品。

上板加樣：酶標板對應孔加入標準品、待測樣本、空白對照 100μL。

酶標記抗體添加：所有反應孔加入 HRP 標記 CD32 抗體 100μL，密封板膜。

恒溫孵育：37℃避光孵育 62min。

洗板去污：棄液后洗液浸泡 40s 拍干，連續(xù)洗滌 4 次。

避光顯色：加入 TMB 顯色液，室溫反應 16min。

終止定量：終止液終止顯色，酶標儀 450nm 讀數(shù)，擬合曲線計算 CD32 濃度。