本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)特異性夾心原理，預(yù)包被CD16特異性抗體于酶標(biāo)板，樣本中的FcγRⅢ抗原與固相抗體特異性結(jié)合，隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體形成免疫復(fù)合物，洗滌純化后進(jìn)行底物顯色，顯色程度與樣本中靶蛋白含量呈正相關(guān)，通過吸光度檢測(cè)與標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，實(shí)現(xiàn)FcγRⅢ的定量檢測(cè)。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E012 |
英文名稱 | FcγRⅢ Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：0.35 pg/mL
檢測(cè)范圍：2pg/mL～105pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育 110min，酶結(jié)合物 40min，顯色 17min，總 167min
保存條件：2～8℃避光密封，鋁箔袋開封后板條盡快使用
顯色系統(tǒng)：TMB 顯色體系，硫酸終止液
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，參比 600nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7 組濃度梯度，四參數(shù)擬合，每板必須附帶標(biāo)準(zhǔn)品
注意事項(xiàng)：加樣順序嚴(yán)格先標(biāo)準(zhǔn)品再樣本，避免交叉污染
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
工作液配制：稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋 CD16 標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)樣本混勻備用。
孔位加樣：每孔添加標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品、空白試劑 100μL，避免氣泡殘留。
一步法酶抗混勻添加：每孔加入酶標(biāo)檢測(cè)抗體 100μL，封板輕晃酶標(biāo)板。
免疫孵育：37℃避光孵育 58min。
洗板操作：棄去孔內(nèi)液體，洗液浸泡 30s 拍干，重復(fù)洗板 5 次。
底物顯色：加入顯色混合液，暗處顯色 14min。
終止檢測(cè)：終止液終止反應(yīng)，450nm 測(cè)定 OD 值，計(jì)算樣本 CD16 含量。
關(guān)鍵字： 人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ;FcγRⅢ/CD16;ELISA試劑盒;
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