本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，微孔板包被人GROα/CXCL1/MGSA特異性抗體，待測樣本、標準品中的靶標抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體，形成特異性免疫夾心復合物，底物顯色后終止反應，酶標儀檢測吸光度，吸光度值與樣本中GROα/CXCL1/MGSA的含量呈正相關(guān)，結(jié)合標準曲線可完成定量檢測。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人生長調(diào)節(jié)致癌基因α/黑素瘤生長刺激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA試劑盒

英文名稱：GROα/MGSA  Elisa Kit
貨號：Y-E281

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：檢出下限 1.9pg/mL

檢測范圍：10pg/mL ~ 750pg/mL

反應時間：37℃孵育 78min，二抗溫育 49min，底物顯色 20min，總耗時 2h27min

保存條件：未拆封 2~8℃，板條拆分后裝入自封袋加干燥劑冷藏，濃縮試劑避免反復凍融

顯色系統(tǒng)：雙液混合顯色，2mol/L H?SO?終止

檢測波長：450nm 單波長檢測

標準曲線繪制：四參數(shù)擬合曲線，8 個標準梯度，空白孔扣除本底

注意事項：炎癥樣本濃度易超標，超出范圍需梯度稀釋重測；操作全程避免手部觸碰板孔底部
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。
實驗步驟如下：

試劑室溫放置 33min，稀釋濃縮洗滌液，梯度配制 GROα 標準品，拆分酶標板條。

標準品孔加 50μL 梯度標準溶液；待測孔加 46μL 稀釋液 + 14μL 待測樣本；空白孔不加試劑。

除空白孔外每孔加入酶標記特異性抗體 100μL，封板 37℃孵育 68min。

倒掉孔內(nèi)廢液，洗滌液浸泡 40s 后甩干，洗板 6 次，徹底拍干板內(nèi)液體。

每孔加入顯色 A、B 液各 50μL，輕微震蕩，37℃避光顯色 17min。

加入終止液 50μL 混勻終止反應。

450nm 讀取 OD 值，擬合標準曲線定量樣本 GROα 濃度。
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