本試劑盒運(yùn)用ELISA間接法檢測原理，將純化的硬皮病70KD抗原（拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ）包被于微孔板固相載體，待測樣本中的抗SCL70抗體與固相抗原特異性結(jié)合，洗板后加入酶標(biāo)記抗人IgG二抗，特異性結(jié)合免疫復(fù)合物，底物催化顯色后測定吸光度，數(shù)值大小與樣本中SCL70抗體含量成正比，可精準(zhǔn)定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最小檢出 0.5 AU/mL

檢測范圍：0.4 AU/mL ~ 25.6 AU/mL

反應(yīng)時間：樣本孵育 95min，酶二抗 50min，顯色 20min

保存條件：2~8℃避光，濃縮試劑出現(xiàn)沉淀需搖勻溶解后使用

顯色系統(tǒng)：雙液 TMB 顯色，終止液終止反應(yīng)

檢測波長：450nm，參考 620nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：X 軸濃度、Y 軸 OD 值，四參數(shù) Logistic 方程繪制曲線定量

注意事項：洗板步驟每孔洗滌不少于 5 次，防止非特異性結(jié)合
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫放置 30min，取出酶標(biāo)板，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)梯度孔、陰性陽性對照孔、待測樣本孔。

每孔添加標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋血清樣本 50μL，馬上加入酶偶聯(lián)工作液 50μL，密封封板。

震蕩混勻微孔液體，37℃孵育 60min。

撕膜倒液，洗滌液浸泡 30s，吸水紙拍干，洗板 5 輪。

顯色底物 A、B 各 50μL / 孔，避光 37℃顯色 15min。

終止液 50μL 加入各孔，搖晃終止反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 測定 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 SCL70 抗體。