本試劑盒基于ELISA間接檢測(cè)原理，將高純度人網(wǎng)硬蛋白抗原固定于微孔板表面，待測(cè)樣本中的抗網(wǎng)硬蛋白抗體（ARA）能夠與固相抗原發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗板去除游離組分后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗人免疫球蛋白二抗進(jìn)行孵育結(jié)合，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，通過檢測(cè)孔內(nèi)吸光度變化，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量檢測(cè)樣本中ARA的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒
英文名稱：AGPA/PCA Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E416
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢出限＜0.8 U/mL
檢測(cè)范圍：1.25 U/mL ~ 80 U/mL
反應(yīng)時(shí)間：一抗孵育 90min，二抗孵育 45min，避光顯色 20min
保存條件：試劑盒整體 2~8℃冷藏，嚴(yán)禁冷凍；微孔板干燥劑密封存放
顯色系統(tǒng)：雙組份 TMB 顯色體系，2M H?SO?終止
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，OD 值對(duì)應(yīng)濃度采用 Logistic 四參數(shù)回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意事項(xiàng)：血清樣本需離心去除溶血、脂血雜質(zhì)；底物液不可暴露強(qiáng)光
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測(cè)依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
所有試劑提前室溫放置 25min，拆分所需條板，剩余板條密封冷藏保存，排布標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、質(zhì)控孔。
標(biāo)準(zhǔn)品孔梯度加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入稀釋后待測(cè)血清樣本 50μL，直接向所有加樣孔添加酶標(biāo)記抗體工作液 50μL，覆膜封板。
臺(tái)面水平晃動(dòng)酶標(biāo)板 1min 混勻，置于 37℃溫箱避光孵育 55min。
揭開封膜，傾倒棄液，每孔注滿洗滌液靜置 25s，倒扣在吸水紙上徹底拍干，循環(huán)洗板 4 次。
按順序每孔添加顯色液 A、B 各 50μL，避光環(huán)境下 37℃孵育顯色 12min。
每孔加入終止液 50μL，輕晃板面使反應(yīng)完全終止。
酶標(biāo)儀單波長(zhǎng) 450nm 讀取吸光數(shù)值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線換算 ARA 抗體濃度。
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關(guān)鍵字： 人抗網(wǎng)硬蛋白抗體;ARA;ELISA試劑盒;
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