本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附法原理，將純化的人中性粒細(xì)胞顆粒抗原固定于微孔板表面，待測樣本中的抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w（ANGA）與固相抗原特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入酶標(biāo)二抗進(jìn)行特異性結(jié)合反應(yīng)，底物顯色后測定吸光度，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量檢測樣本中ANGA抗體的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出 0.7 ng/mL

檢測范圍：0.2 ng/mL ~ 12.8 ng/mL

反應(yīng)時間：孵育 65min，二抗 35min，避光顯色 17min

保存條件：2~8℃冷藏，不可冷凍，板條密封防潮

顯色系統(tǒng)：TMB 顯色，酸性終止液終止

檢測波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品倍比稀釋，以 OD - 濃度對應(yīng)關(guān)系繪制四參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：加樣槍頭一次性更換，杜絕交叉污染
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫復(fù)溫 21min，拆分所需板條，設(shè)置對照與樣本孔。

孔內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋待測樣本 50μL，同步加入酶工作液 50μL，封板密閉。

混勻液體后 37℃孵育 57min。

棄液洗板，洗液浸泡 27s，拍干，洗板 4 次。

顯色 A、B 液每孔各 50μL，避光顯色 12min。

加入終止液 50μL 終止反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，計算 ANGA 抗體濃度。