本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，將抗人可溶性白細胞抗原G（sHLA-G）單克隆抗體包被于微孔板，待測樣本中的sHLA-G抗原與固相抗體特異性結合，再加入酶標記多克隆抗體形成夾心復合物，洗滌顯色后檢測吸光度，數(shù)值與樣本中sHLA-G含量正相關，實現(xiàn)定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出下限 0.4 U/mL

檢測范圍：0.25 U/mL ~ 16 U/mL

反應時間：孵育 80min，二抗 45min，顯色 18min

保存條件：試劑盒整體 2~8℃冷藏，稀釋后洗滌液常溫可放置 5 天

顯色系統(tǒng)：單組分 TMB 顯色底物

檢測波長：450nm，參比 620nm

標準曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合標準曲線，自動換算待測樣本濃度

注意事項：血清、血漿、細胞上清均可檢測，不同樣本基質(zhì)不可混用曲線
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫放置 34min，取出酶標板，設置空白、對照、標準、樣本孔。

除空白孔外每孔加樣 50μL，立刻加入酶標記液 50μL，嚴實封板。

低速振蕩混勻，37℃孵育 67min。

倒凈孔內(nèi)液體，洗滌液浸泡 37s，充分拍干，洗板 6 次。

顯色液 A、B 各 50μL，避光顯色 18min。

加入終止液 50μL 終止顯色。

450nm 測 OD 值，標準曲線定量 sHLA-G。